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范文一：双缩脲试剂
（一）实验原理
双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材
1. 试剂：
（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。
（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4&8226;5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6&8226;4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
2. 器材：
可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。
（三）操作方法
1. 标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。
2、样品的测定：取2～3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。
范文二：双缩脲试剂配置
(一) 方法学评价试验 双缩脲试剂配置
摘要
目的：掌握双缩脲法的试剂的配置，并熟悉和掌握分光光度计的使用方法 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理与操作
方法：标准管法测物质含量的方法、双缩脲法测定蛋白质含量的方法、
双缩脲反应法
结果：成功的配置双缩脲试剂，血清总蛋白的量是38.27g/l.
结论：能够按照正确的方法配置双缩脲试剂，并测定出血清总蛋白量。
英文翻译
Abstract Master configuration Biuret reagent，and Familiar with and master the use of the spectrophotometer。Master the principle and operation of the determination of total proteins by Biuret Method。
Methods Standard tube method to measure the material content，
Double deflation urea method for the determination of protein content and Biuret reaction.
Result configuration of biuret reagent Successfully ,The serum total protein amount of 38.27g/l.
Conclusion We can use the correct way to configured Biuret reagent, and we know determination of serum total protein.
关键词： 双缩脲法 配置 血清总蛋白
前 言
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色 络合物，此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲 反应。蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行测定，这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。
1.材料和方法
1.1材料 硫酸铜（CuSO4·5H2O）、酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）、KI固体 NoOH晶体 标准蛋白质溶液 可见光分光光度计、钥勺、试管、烧杯、 玻璃棒、旋涡混合器
1.2 方法（操作过程）
（1）6mol/L NaOH溶液25ml：用烧杯称取NaOH 6 g，量取蒸馏水25 ml加 入烧杯溶解NaOH，备用。
（2）双缩脲试剂，称取以0.75克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶于新鲜制备的
500ml的蒸馏水，加入2.25克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O），【用于结合Cu2+,用于防止CuO在碱性条件下沉淀】并加入KI 1.5g【防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析】，等到完全溶解后，在搅拌下加入6g/lNaOH溶液25ml，并
用水定容到250ml，放置塑料瓶中盖紧保存。
（3）取三支试管按下表进行操作
试管号 空白管B 标准管S 测定管T
血清（mL） 0 0 0.06
标准蛋白（mL） 0 0.06 0
蒸馏水（mL） 0.06 0 0
双缩脲试剂（mL） 3 3 3
旋涡混合器摇匀，37℃水浴10分钟,后用分光光度计于540nm波长处比色，以空白管调零点，测得各管吸光度。
2.结果
标准管是0.185，待测管是0.118， 血清总蛋白（g/l）=Au/As x C标准（g/l）=0.118/0.185x60g/l=38.27g/l
3、讨论
3.1 实验结果讨论
3.1.1 我的结果是：S / Abs. T=0.185/0.118=1.568/与参考范围接近，说
明实验误差不是很大本次实验的结果参考范围应该是
Abs. S≈0.140 – 0.160，
Abs. T≈0.090 – 0.110， Abs. S / Abs. T≈ 1.5,
对部分同学结果进行讨论：
3.1.2 同学甲 Abs. S=0.259，Abs. T=0.211，此同学的结果偏大，原来是该同学加样的是误把蛋白质标准溶液加了0.1ml.把双缩脲试剂加5ml，做实验不够认真和细心。
3.1.3 同学乙 Abs. S=0.088，Abs. T=0.061，这个同学的结果偏低，是他加样
的时候，由于加样枪的枪头已经部分老化，封密性不够好，导致加的蛋白质标准溶 液不够0.6ml。以后做实验时候一定要注意实验仪器造成的误差。
3.1.4同学丙 Abs. S=0.113，Abs. T=0.096,是由于此同学在操作加样枪的时候，
按针筒的时候用力过度，导致每一次加样都是超过0.6ml，是操作不规范造成的实验误差。
3.2 实验过程中的讨论
3.2 .1 加试剂时候按不同的顺序会出现不同的溶液颜色的变化。
实验中，加的试剂要先硫酸铜结晶（CuSO4·5H2O）溶于新鲜制备的
蒸馏水，然后加酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·4H2O，接着加KI，班上有同学是加
了硫酸铜结晶CuSO4·5H2O）然后加KI，最后才加酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·4H2O，结果颜色是咖啡色，变成咖啡带绿色，实验需要重新做，
3.2 .2 加入的氢氧化钠是为了提供碱性环境，向试剂中加入碘化钾，是为了 延长试剂的使用。
3.2 .3 蛋白质定量测量方法除双缩脲法外,还有如下几种测定方法：寿凯氏定氮 法、紫外吸收法、folin-酚试剂法、考马斯亮蓝法。 4.方法学评价
双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物，在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
优点：双缩脲法测定蛋白质测定范围能够是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好， 双缩脲试剂可以长期保存（ 若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制）。
缺点：灵敏度差，测定范围窄，样品需要量大，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 干扰测定的物质包括有：在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。
5.临床意义： 用双缩脲法测定蛋白质含量，假如血浆蛋白质浓度增高，临床上主要见于因各种原因引起的血浆浓缩；假如血浆蛋白浓度降低，临床上主要见严重肝病、肾病、营养不良、血液稀释等，对有关疾病的早期诊断预后观察具有一定的参考价值。
参考文献
[1] 叶应妩, 王毓三. 全国临床检验操作规程[M] . 第2 版. 南京: 东南大学出
版社,1997: 155～156.
[2] 赵丽丽,等. 不受高脂血症影响的双缩脲试剂[ J].临床检验杂志, 1993;11:4. [3] 刘新光，临床检验生物化学实验指导[M].第一版.高等教育出版社，2006；111-113.
范文三：双缩脲试剂(AB液)
北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com
双缩脲试剂(AB液)
简介：
双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色。所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例，可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。双缩脲试剂(AB液)由Biuret Reagent A、Biuret Reagent B组成，如组织里含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应，颜色深浅与蛋白质浓度成正比。该试剂是较为粗略的验证蛋白质存在的方法，多用于定性检测蛋白质。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 先将Biuret Reagent A 3ml加入待测样品3ml，振荡均匀，以便产生碱性环境。
2、 加入2~3滴Biuret Reagent B，振荡均匀，如果组织里含有蛋白质或具有两个或两个
以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应，颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
3、 如果想采用分光光度计或酶标仪测定，应于540nm波长处的吸光值，如无540nm，
520～562nm之间的波长也可，根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
注意事项：
1、 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果发现检测效果不佳，，颜色会随着时间的
延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快。
2、 检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
范文四：双缩脲试剂（ ml
双缩脲试剂( ml )
5.0
5.0
5.0
混匀，置 25 ? 30 分钟 ( 或 37 ? I0 分钟 ) ，在波长 540nm ，以空白管调零，读取各
管吸光度。 ( 三 ) 计算:
测定(或校正)吸光度
血清总蛋白 g/L ×标准蛋白液浓度( g/L ) 标准吸光度
三、血清白蛋白溴甲酚绿法测定
( 一 ) 试剂
1 ( 0.5mol/L 琥珀酸缓冲贮存液， PH4.0 2 (溴甲酚绿 (BCG) 贮存液 (10mmol/L)3 (叠氮钠贮存液
4 (聚氧化乙烯月桂醚( BRIJ , 35 )贮存液 5 ( BCG 试剂
6 (白蛋白标准应用液 40g/L ( 二 ) 操作
按下表步骤进行
血清白蛋白测定
加入物
测定管
标准管
空白管
待测血清( ml )
0.02
白蛋白标准液
0.02
蒸馏水( ml )
0.02
BCG 应用液( ml )
4.0
4.0
4.0
混匀，室温放置 10 分钟，在波长 630nm 空白管调零点，读取各管的吸光度。
(三)计算
测定管吸光度
血清白蛋白 (g/L)= ×标准白蛋白浓度( g/L ) 标准管吸光度
四、临床意义
( 一 ) 正常值:总蛋白 60-80g/L
白蛋白 40-55g/L
球蛋白 20-30g/L
A/G 1.5-2.5/1
( 二 ) 急性或局灶性肝损伤时， TP 、 A 、 G :及 A/G 多为正常。重症肝炎时多数病例 TP 不下降，而γ - 球蛋白增加。亚急性重症肝炎 TP 常随病情加重而减少，若进行性减少，应警惕发生肝坏死。肝硬化，慢性肝炎等，多有白蛋白减少和球蛋白增加。白蛋白的含量与有功能肝细胞的数量呈正比。
A/G 比值见于肝功能严重损伤。
范文五：双缩脲总蛋白试剂
北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com
双缩脲总蛋白试剂
简介：
双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色。双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响，另外，对于血清总蛋白的双缩脲分析，胆红素、脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用。Leagene双缩脲总蛋白试剂由硫酸铜、酒石酸钾钠、氢氧化钠等组成，在10～160mg/ml浓度范围内有较好的线性关系，是对蛋白质的精确定量分析试剂。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、取1ml蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准(BSA)中，充分溶解后配制成160mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
2、将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的标准品孔，加稀释液补足至20μl。
3、加适当体积待测蛋白样本到96孔板的样品孔中。如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液不同。
4、各孔加入200μl双缩脲总蛋白试剂, 室温放置。
5、测定540nm波长处的吸光值，如无540nm，520～562nm之间的波长也可。
注意事项：
1、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
2、 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置1h或
60℃放置15min，颜色会随着时间的延长不断加深。
3、 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因
是样品中含有铜离子螯合剂。
4、 建议每次测定时都做标准曲线。因为颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应
的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度。
5、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检
测体积。
6、 检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
