我有一双看穿衣的眼睛
范文一：组织芯片制作流程
组织标本收集处理操作流程
组织标本的收集
每例标本取9块:癌肿组织3块、癌旁组织(距离肿瘤组织1.5cm)3块、癌旁“正常组织”3块
液氮保存(各3块) 超低温冰箱
70%分析级乙醇(各3块) 病理石蜡块
10%中性缓冲福尔马林溶液(各3块)
组织标本的处理
1. 组织标本取材，每块组织分割成5 mm X 15 mm X 15 mm大小。
2. 用ASP300全自动组织脱水机对组织标本进行脱水处理。(下为脱水处理程序)
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30min30min30min30min30min30min1h1h2h2h2h2h1h1h
3. 用石蜡包埋机将组织标本包埋成病理石蜡块。
4. 用全自动石蜡切片机对病理石蜡块切片制成4微米厚的病理组织切片。
5. 用全自动染色机对病理组织切片进行HE染色。(下为HE染色程序)
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30 s30 s7 s7 s6min6min10 s10 s15 s15 s5min5min6min6min3min3min45min45min4min4min2min2min
组织芯片的制备流程
1. HE染色切片病理诊断，并标记病变组织的范围。
2. 按照实验目的设计组织芯片阵列的组织类型和排列方式。
3. 在组织数据库中选择合适的组织病例编号。
4. 按照组织病例编号从组织库中取出组织蜡块和对应的HE染色切片。
5. 用组织包埋机制备合适的空白受体蜡块。
6. 用组织阵列仪按照阵列设计抽提病理蜡块组织芯并有规律的排列在空白受体蜡块上。 7. 组织阵列块在52?恒温烤箱中加热融合，使组织芯与受体蜡块紧密相连。 8. 用全自动组织切片机以20微米/转的进刀速度对组织阵列块进行修整蜡块，直至80%的组织芯完全曝
露。
9. 用全自动组织切片机以4微米/转的进刀速度对组织阵列块进行切片，切片裱附在防脱片处理的进口载
玻片上。
10. 阵列切片置于60 ?恒温烤箱中烤片16个小时。
11. 组织芯片按编号每隔10张抽取一张作HE染色。
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12. 病理医生对抽检组织芯片中每一个组织样本进行复诊质检，结果由信息部输入组织芯片数据库。 13. 组织芯片实验白片保存在切片盒中，置于冰箱5 ?冷藏室保存。
14. 对使用过的病理组织蜡块封蜡，并将其和对应的HE染色切片归位放回蜡块柜和切片盒。
范文二：简易组织芯片仪的制作
简易组织芯片仪的制作
(作者 :___________单位 : ___________邮编 : ___________)
【关键词】 芯片分析技术; 分子探针技术; 显微镜检查
与传统的病理研究方法相比, 组织芯片具有省时、 经济、 信息 量大,并能节约标本及大大提高实验效率等优点,应用非常广泛 [1], 但由于组织芯片机价格昂贵, 难以普及推广。 笔者利用本科室退役的 显微镜研制组织芯片仪,并用其制作组织芯片,取得很好的效果,现 报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 骨髓穿刺针 2支(16G 和 18G ) , 16 W发热元件,温度 控制器 1个,强力胶水 1瓶,退役的带有三坐标的显微镜支架 1台, 45号圆钢 2段(分别为长 104 mm,直径 56 mm;长 40 mm,直径 88 mm) ,电源线 2条。
1.2 方法
1.2.1 打孔针和取样针的制作 16G 带有 M4螺纹的骨髓穿刺针 (最 小内径为 1.1 mm)用于取样; 18G 带有 M4螺纹的骨髓穿刺针(最
大外径为 1.3 mm) 用于打孔。 用砂轮将针尖末端截断 (包括芯和鞘) , 保留螺纹以下至针尖末端的长度约 1~2 cm。 取一段内径分别与 16G 或 18G 骨髓穿刺针外径相当的单芯电线绝缘护套,将其相应地紧紧 套在 16G 或 18G 骨髓穿刺针的鞘上,使其下缘与针末端的距离为 5 mm 。塑料外套与针末端的距离可根据供体蜡块的厚度调整,但打孔 针和取样针的外套层和针末端的距离应保持一致(图 1) 。
上为打孔针,下为取样针 .
图 1 打孔针和取样针的制作
Fig 1 Top one is hole puncture needle and bottom one is sampling needle
1.2.2 恒温加热装置的制作 根据热学原理设计出蓄热体(由 45号 圆钢加工制成) (图 2A 、 B ) ,内嵌入加热元件(图 2C ) ,采用双加 热系统,通过温控装置调节温度,使其保持在(60±1)℃(较石蜡 的熔点 58 ℃稍高) ,保证打孔针和取样针处于恒温。
1.2.3 操作平台和矩阵定位系统的制作 利用退役的显微镜, 保留机 械和支架系统, 利用载物台放置供体蜡块和受体蜡块。 用一块厚度为 3 mm的有机工程塑料板,制成尺状结构,利用强力胶水粘在显微镜 的推进器上,用于蜡块的准确定位(图 3) 。推进器用于受体蜡块打 孔时前后(X 轴)左右(Y 轴)的位移,以保证所打的孔矩阵排列整 齐。旋转镜柱上的调节器(粗细螺旋)使镜台作上下方向(Z 轴)的 移动,实现打孔和取样深度的准确控制。至此,一台功能基本齐全的 组织芯片仪就改装成功,并可用于组织芯片的制作(图 4) 。
1.3 结果 用制作完成的组织芯片仪制作组织芯片,芯片以规则的 点阵方式排列不同的圆形组织芯片样本, 排列整齐, 无点阵移位现象, 供、 受体蜡块紧密融合,经 H E 染色验证,样本组织大小均匀、结构 完整(图 5) 。
2 讨 论
笔者自行研制组织芯片仪, 实现废物利用, 制作成本低廉; 且应用 此组织芯片仪制作组织芯片, 简化了对蜡块的烘烤等制作流程, 对操 作者的技术要求不高,只要简单培训即可做出高质量的组织芯片。 在制作芯片仪的过程中,选择打孔针和取样针时应注意针的孔径, 打孔针的外径要等于或稍大于取样针的内径, 但最多不超过 0.2 mm, 以保证供受体蜡块完全融合; 打孔针和取样针的有效使用长度应适宜 (约 1~2 cm ) ,太长导热慢且效果差,而且容易变形,无法保证针 的刚性, 太短则无法有效地打孔和取样; 塑料外套与打孔针和取样针 末端的距离可根据供体蜡块的厚度调整, 但两针的外套层和末端的距 离应相等, 保证打孔的深度与所取的组织芯柱的长度一致, 使所有待 检的组织芯片在受体蜡块的同一水平面上。 在恒温加热装置的设计时 将温度控制在 (60±1) ℃, 比石蜡的熔点 58 ℃稍高一些, 其目的是: (1)在打孔和取样的过程中供、受体蜡块不开裂; (2)受体蜡块和 所取组织芯柱能够更好地融合; (3)更好地保留供体组织的抗原性, 减少免疫组化染色时的边缘效应。 加热恒温装置的引入, 解决了传统 手工制作时烤蜡块“火候”难以掌握的缺点,在制作芯片过程中无需对 供、受体蜡块进行加热,并且在蜡块制成后也不必烤蜡块,就能直接
切片,简化组织芯片的制作流程,降低芯片的制作难度,节约了大量 的时间和精力。
用自制的组织芯片仪制作的组织芯片各孔排列整齐, 大小均匀。 与 组织芯片制孔器等相比 [2], 其优点是可根据需要设计不同孔径的打 孔、 取样针和调节孔间距, 其功能元素可与市售的组织芯片仪相媲美。 【参考文献】
[1] 孙廷谊 , 张云汉 , 孔令非 . 组织芯片的研制及效果 [J]. 郑州 大学学报 :医学版 , 2007,42(1):116118.
[2] 沈洪武, 叶 莉 , 吴文乔 , 等 . 组织芯片制孔器和受体蜡块的制 作 [J]. 中 华 病 理 学 杂 志 , 2007,36(9):624.(编 辑 :何 佳 凤 )Self Fabrication of Tissue Chip Instrument
范文三：组织学考试用组织芯片制作初探
组织学考试用组织芯片制作初探 2005年第27卷第3期AnatR盟'20H05'ol,N0: ?
技术方法?
组织学考试用组织芯片制作初探
江涛吕少文李红张诗武庞奕晖何文形王英慧
(武警医学院组织胚胎学教研室,天津300162) 【摘要】目的实现组织芯片在组织学教学中的应用.方法取正常Wistar大鼠心,肝,
肾,脾等器官,采用组织芯片
仪制作组织微阵列蜡块,常规切片,经苏木精一伊红染色制成组织学考试用组织芯
片.结果芯片中组织微阵列排列整
齐,各样本组织染色清晰,组织定位良好,可判断性强.结论与传统组织切片相比,组
织学考试用组织芯片具有低消耗,
可比性强,简便易行,局限性小的特点,应用前景广阔. 【关键词】组织芯片;组织学;考试
组织芯片又称组织微阵列(tissuemicmarray)是将数
十个,数百个乃至上千个组织样本整齐地排列在某一载体 上(通常是载玻片)而成的微缩组织切片[.1998年Kononen 等在《自然》杂志上首次报道了组织芯片这一高通量的技 术['],由于其具有高效,快速,低消耗,信息含量大,可比 性强.可按不同的需要进行设计和组合等特点,组织芯片 在医学科学研究中得到迅速发展.不仅如此,组织芯片的 上述特点同样适用于医学形态学教学[3],为实现组织芯片 在组织学教学中的应用,我们开展了组织学考试用组织 芯片的研制工作并显示了良好的应用前景.现介绍如下. 1.6构建蜡块微阵列
将受体石蜡块固定,在组织芯片的第一个位置用小的
不锈钢针打一个小孔,依靠这个小孔将测微计调零,调整 深度控制螺丝以保持空心针合适的深度.用细空心针打孔 完毕后,旋转角塔,用粗空心针从供体石蜡块上获取样本, 然后将样本送人打好的小孔内.用测微计调整到下一个打 孔位置,重复上述操作[.
1.7切片与染色
组织切片厚度为5m,行常规苏木精一伊红染色,中 性树胶封片.
1材料和方法2结果
1.1取材与固定
取正常Wistar大鼠心,肝,肾,脾,肺,胃,胰腺,食管, 气管,十二指肠,空肠,回肠,卵巢,睾丸,淋巴结,胸腺,膀 胱,骨骼肌共18个器官的组织块,厚3-5mm;4%中性甲 醛固定24h.
1.2供体组织蜡块制作
行常规组织处理,石蜡包埋.
1.3组织定位
做5m组织切片,行常规苏木精一伊红染色,选择 目标组织并分别在相应石蜡组织块上标记,进行组织定 位.
1.4受体石蜡块的制备
将石蜡熔化,浇灌在与组织芯片仪组织接受器和供体 组织块转送桥大小一致的模子中,石蜡冷却后移走模子, 切去蜡块四周的毛边.
1.5芯片微阵列的设计
在上述18个器官的组织块中,每种器官取4个位点. 在受体石蜡模块上构建8x9共72点阵列蜡块,两个相邻 样本之间的距离设定为1舢.
基金项目:武警医学院教学研究专项经费项目(WYJ0306)
1.武警医学院病理学教研室
肉眼观察制成后的组织芯片.可见组织微阵列.排列 较整齐,相邻样本组织之间距离基本一致,部分芯片可出 现组织微阵列漂移或缺损现象:普通光学显微镜低倍镜下 可见各样本组织染色适当,组织定位良好,可判断性强(图 1,2),其中淋巴结,胸腺,胰腺染色较深,骨骼肌,心肌染色 相对较浅,肝脏可出现染色不均匀的现象.高倍镜下可见 组织细胞结构完整,层次清晰,可读性强(图3,4). 3讨论
3.1组织芯片运用于教学中的优势与不足
同一般组织学或病理切片相比,组织芯片在形态学 教学中的优势显而易见.以组织学教学为例,通常情况 下,组织学教学要求学员观察20—30张正常组织切片.假 设100名学员同时上课,则需2000—3000张切片.如果 采用组织芯片,则每人只需一张切片.从而极大程度上节 省了人力,物力.组织芯片体积小,信息含量高是其明显的 优点.但由于组织芯片中组织样本面积小,对某正常组织 或病变组织的代表性势必降低,不利于学员全面掌握组织 的形态特点.此外,由于在组织学及病理学教学中涉及铺 片(如疏松结缔组织铺片),涂片(如血涂片),磨片(如骨磨 片)等特殊切片,因而组织芯片并不能完全替代教学中的 现有切片.
,
图1肚气瞥.黏膜黏F甚翱讣膛层清晰.假复屡毛朴状j应厦透软骨错完整HExIt)O
图2^脾I髓.动脉罔徘巴『帏小坫骚也缘压等结向完世清晰HE×100
图3儿鼠小肠黏城毛.?i层朴『Ij:上皮杯状【胞硬绒毛一1I轴疏结缔绸织i1:~2(XJ
圈4九肺可肿泡忡池健硅肺抱附HEx200
3.2组织芯片运用于组织掌切片考试中的可行性 峰皆玎}织片话用r教学中fI】t定埘J皑吐.世将 蛆担芯片运川r组织学切片【式中肆仃叫显的优势.』 原吲:1雠凡程度I减删』II)i叶的蚍艟帔纽学 片考试需{l试i0,张盟高跪娃正常组纽切H{设 [00名学尻同时参加#武.刚需Ion0,2O011张切片.{l界 采用编芯H进行考试则l人H需?片学员孳 成绩可比性蛳采用目!HJ参母试人员使川
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3组织学考试用绲织芯片制作中应注意的问跖 组蚶芯片的制作过释较常挑切片相对堑杂.值得沣_蕞 的题摧多过多献寅践.我们认为组錾l微阵列的定似
受体蜡块制作是萁rp较关键的问题组绑儆阵列定仳不
准确nf直接造成芯片制作的*啦.如粜事先将每个待研究 的蜡包埋样本均糊作张HE船乜片在显懒镜下将
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枣
摹_...箍蔫?..,.毒..
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蜡中加入1g左右的硬脂酸钠将会使石蜡的柔韧性和硬
度之间达到一个很好的平衡.
参考文献
1.刘卫平,张红英,郭嘉,等.组织芯片技术及其在病理学
研究中的初步应用冲华病理学杂志,2002,31:179-180. 2.KononenJ,BudendorfL,KallioniemiA,eta1.Tissue
2005年第27卷第3期AnatRes,2005,yol2J,: mieroarraysforhish-throughputmolecularprofdingof
tumorspecimens.NatMed.1998,4:844-847.
3.向正华,吕军,蒋平,等.组织芯片技术及应用.解剖
学杂志,2002,25:403-405.
4.张诗武,张永亮,魏焕萍,等.组织芯片技术及其应用. 武警医学院学报,2002,11:125-127. (收稿日期:2005.03.10)
(上接2oo页)直接观察基底动脉及分支的狭窄和闭塞 情况,可明确诊断.(6)注意与中毒和代谢性脑病,颅内感 染性脑病等鉴别.
6治疗
应早期诊断,积极争取6h内溶栓,不能溶栓的可以 给予抗纤,抗凝,抗血小板聚集治疗.在导管介入下局部动 脉溶栓,效果最佳,后遗症少;静脉溶栓效果次之,后遗症 多;未溶栓者预后不良].(1)足量应用脱水药物:中脑, 小脑,枕叶均在后颅凹紧邻延髓呼吸中枢及心血管中枢. 病变部位脑水肿极易诱发枕骨大孔疝,故应充分脱水降颅 压,而不能用大脑半球梗死面积的大小来衡量脱水药物的 用量.(2)积极防治并发症:脑下部受损易出现植物神经功 能失调,最常见顽固性呃逆,上消化道出血,对症治疗利于 疾病的预后.(3)病因治疗:TOBS最常见病因是心脏或动 脉硬化附壁血栓脱落所致,因此长期抗凝或抗血小板治疗 非常关键.他汀类药物如立普妥等可以有效稳定动脉硬化 斑块,防止栓子脱落.(4)保持呼吸道通畅,纠正呼吸衰竭: TOBS易出现球麻痹,引起呼吸道梗阻,加重脑部缺氧,故 应使患者保持侧卧位防止舌后缀,严重者放置口咽管或气 管切开,维持呼吸道通畅,改善缺氧.一旦脑干受损发生呼 吸节律改变,需用呼吸兴奋剂或呼吸机辅助呼吸. 此外,脑细胞保护剂,抗氧自由基,钙离子拮抗剂,活 血化瘀,催醒,康复治疗等综合治疗方案也十分重要. 7预后
本病预后不良,治愈率低,致残率高.Saposnik等认 为预后与脑卒中发生机制,脑梗死部位与体积,侧支循环
建立速度的快慢,血流动力学,自身血液状态及治疗时间
窗等有密切的关系.
参考文献
1.CaplanLR.Topofthebasilarsyndrome.Neurology, 1980,30:72.
2.孙吉山,宿英英.基底动脉尖综合征,临床神经病学杂
志,2000,13:373,374.
3.SatoM,TanakaS,kohamaA.Topofthebasilar syndrome:elinieo-radiologiealbasilarevaluation. Neuroradiology,1987,29:354-359.
4.CarodArtalFJ,VargasAP,MeloM,eta1.Topofthe basilarsyndromeandChagasdisease.RevNeurol,2002, 351:337-344.
5.WayJ,LopezYunezA,BeristainX,eta1.Paradoxical embolismtothebasilarapexassociatedwitIlMay-Thumer syndrome.ArchNeurol,2000,57:1761,1764.
6.RosmanNP,AdhamiS,MannheimGB.eta1.Basilar arteryocclusionchildren:misleadingpresentations, "lockedin"state,anddiagnosticsimportanceof accompanyingvertebralarteryocclusion.ChildNeurol, 2003,18:450-462.
7.徐惠琴,牛平,王耀山.基底动脉尖综合征的临床与病
理.临床神经病学杂志,2004,17:20.
8.MehlerMF.rnlerostralbasilararterysyndrome: diagnosis,etiology,prognosis.Neurology,1989,39:9-16. 9.MartinPJ.Vertebrobasilarischaemia.QJM,1998, 799—811.
10.PulhcinoP,LincoffN,TruaxBT.Abnormalvergenee withupperbrainsteminfarcts:pseudoabducenspalsy. Neurology,2000,55:352-358.
11.UsonMM.GraciaNM.Topofthebasilarartery syndrome:clinicoradiologicalaspectsof25patients.Rev Neurol,1999,28:698,701.
12.GraeiaNM,UsonMM,CarodAJ,eta1.Basilarartery rostralocclusionsyndromeclinicoradiologiealassessment of56patients.RevNeurol,1998,26:138-142.
13.KoyamaT,HongoK,TanakaY,eta1.Simulationof thesurgicalmanipulationinvolvedinclippingabasilar arteryaneurysm:conceptsofvirtualclipping.Technical note.JNeurosurg,2000,93:355-360.
14.SchumacherM,YinL,KlischJ.eta1.Local
intmarterialfibrinolysiswithoutarterialocclusion. Neuroradiology,1999,41:530-536.
15.CaplanSG.Ischemiaofthevertebrobasilarterritory: mechanismsandpracticalconsiderations.RevNeurol, 2001,33:854-864.
(收稿日期:2005.05.20)
范文四：组织芯片制备技术路线和制作过程
来源：丁香通
通过组织芯片制作机细针打孔的方法，从众多的组织蜡块（称为供体蜡块，donor）中采集到数十至上百的圆柱形小组织（组织芯，tissue core），并将其整齐排列另一空白蜡块（称为受体蜡块，recipient）中，而制成组织芯片蜡块。然后对组织芯片蜡块进行切片，再将切片转移到载玻片上制成组织芯片。
1、芯片微陈列设计：在构建组织芯片之前，应该预先计划检测多少样本，然后相应地进行设计。对大多数研究来说，在一个常规的载玻片上放置60~100个样本已经足够了。当样本超过100例时，上样、切片、染色及研究各个步骤都要求相当熟练，并且由于样本排列过于紧密，有可能导致芯片制作和研究失败。因此在计划检测数百个到上千标本时可考虑多做几个组织芯片。2、收集病例及相关蜡块：挑选出具有随访资料的不同发展阶段的肿瘤组织蜡块，根据HE切片对石蜡标本中有代表性的点进行标记，包括典型的肿瘤和相应的正常组织，以构建肿瘤组织芯片。3、TMA受体蜡块制备：取97.5克莱卡石蜡+2.5克蜂蜡（2.5%）混合，制成长36mm*宽26mm*高17mm的空白蜡块，在该蜡块20mm×16mm范围内设计10×8点组织陈列。组织四周预留0.5cm-0.7cm空间，用组织仪打孔制成TMA蜡块。4、 在组织芯片制作机上用细针对受体蜡块打孔，孔径以1~1.5mm比较适宜。5、同样在供体蜡块上标记的相应部位打孔采集组织芯。孔径同样为1~1.5mm。6、将组织芯转移到受体模块的孔中，每个组织芯之间的间距以0.2mm为佳。7、为了防止在打点、切片、染色或免疫组化过程中出现漏点，滑片及掉片现象，每个样本可以上样1-2个点。8、将构建好的TMA芯片蜡块放在相宜的塑料盒子内，并严密固定防止移位。放入55℃温箱中约10分钟，在蜡将要完全溶解前，取出室温下冷却，使受体模块的蜡与新插入的小圆柱状组织溶为一体，取下蜡块，于4℃冰箱中保存备用。9、切片前，蜡块需在4℃中预冷4h左右，然后夹在切片机上进行修正，等修到全部组织完整为止。用-20℃预冷冰袋贴在蜡块上5-10min左右，快速连续切片30-50张左右，再用冰袋冷冻组织块，或直接在冰冻切片机内进行，直至将组织切完为止。将4μm连续切片分别漂在凉水中，让其自然展开，按顺序将切片转移至45℃的温水中展片2min左右，将其贴在浸有APES切片黏合剂的载玻片上晾干，60℃中烤片3min左右，58℃中继续烤片18h，-20℃保存备用。
范文五：组织芯片
组织芯片初步学习
13临七卓医 韦卢鑫 1330705103
组织芯片是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组 织切片。它分为多组织片 , 组织阵列和组织微阵列。组织芯片的特点是 :体积小 , 信息含量大 , 一次性实验即可获大量结果。组织芯片可用于组织中的 DNA 、 RNA 和蛋白质的定位分析和检测。像普通组织切片一样 , 可做 HE
染色、特殊染色、 免疫组织化学染色、 DNA 和 RNA 原位杂交、荧光原位杂交。组织芯片蜡块可做 100 ~ 200 张连续切片。这样用同一套组织芯片即可迅速的对上百种生物分子 标记 (如抗原 , DNA 和 RNA) 进行分析、检测。因此组织芯片技术是建立疾病 , 特 别是肿瘤的生物分子文库的强有力的工具。
图 1 组织阵列由 41 例淋巴瘤组织组成 , 组织的直径是 2.0 mm
图 2 组织微阵列由 200 多不同发展时期的膀胱癌组织组成 , 组织的直径是 0.6 mm
组织芯片的基本制作方法 :通过组织芯片制作机细针打孔的方法 , 从众多 的组织蜡块中采集到数十至上千的圆柱形小组织 , 并将其整齐排放到另一个空 白蜡块中而制成组织芯片蜡块。 然后 , 对组织芯片蜡块进行切片 , 再将切片转移 到载玻片上而制成组织芯片。
组织芯片的应用有:
(1)寻找疾病基因::组织芯片与基因芯片配合使用在寻找疾病基因中有很 好的互补作用。具有强大的检测基因的功能利用这些新技术 , 但是 , 这些技术不 能将原发改变的基因和继发改变的基因区分开来。 换句话说 , 在这些改变的基因 H &E 染色部分从乙醇固定多肿瘤阵列 (A )
四个数组元素:肾癌(B ),鳞状细胞癌
肺(C )中,小叶浸润性乳腺癌(D )和结
肠癌(E )。 B-E , x400。
中哪些是真正的肿瘤基因
, 哪些是次要的和无关的基因 , 基因芯片技术不能解 决这些问题。 因此 , 基因芯片筛选出的候补肿瘤基因必需放到大量的实际病例中 去检验 , 并且还需大量体外功能实验和体内实验的验证。 将基因芯片筛选出的基 因作成探针 , 再将探针与组织芯片中众多的肿瘤组织进行荧光原位杂交 , 然后 找出哪些基因与肿瘤有关。例如 ,1998 年 Kononen 等首次报道了采用 645 个乳 腺癌标本制成的组织芯片对 6 个基因和两个抗原进行了检测。结果显示 , 其中 4 个基因 (ERBB2, CMYC , CCND1 和 cyclin D1)已为人们所知 , 而新筛选出的两个 基因 (17q23 和 20q13) 与乳腺癌的关系则是首次发现。
(2)寻找与肿瘤发生发展及预后相关的生物分子标记:1999 年 Bubendorf 等用前列腺组织不同阶段的病变 (制成的组织芯片对 5 个基因 (男性激素受体基 因 , myc ,erbB-2, 细胞周期蛋白 D1 和
N-myc) 进行了检测分析 , 证明前列腺组 织不同阶段的病变具有一些相关的基因类型 , 转移癌与 my c 基因扩增有关 , 激 素治疗失败后的局部复发癌和转移与男性激素受体基因扩增有关。 这些新的认识 有助于分析肿瘤患者的预后和制定有针对性的治疗措施。
基因芯片与组织芯片配合使用能够迅速的筛选基因和评估其生物学作用 , 有助 于建立与诊断 , 治疗和预后有关的参数。
(3) 测试生物试剂 :生产出的抗体和探针需要做特异性和敏感性测试。 这种 测试需要对大量不同来源的组织 , 阴性和阳性对照组织进行检查。 如果采用普通 组织切片做测试 , 就需要做大量切片 , 多次实验 , 消耗大量试剂 , 人力和时间。 如果采用组织芯片测试 , 一张组织芯片一次实验即可完成。 因此 , 组织芯片的优 点显而易见。
组织芯片的优缺点评估:
优点::(1)高产出 :一次实验可得到大量结果 ;(2)实验误差小 :组织芯片中的众多 组织都处在相同条件下进行实验 , 因此较传统的一个病例一张切片的实 验误差小 ;(3)省时、省力、节约开支 ;(4)对原始组织蜡块损坏小。
局限性::由于构成组织芯片的组织很小 , 因此必然会出现一个问题 , 即这些小组 织是否能够代表其原来的组织 ? 特别是在对有多种组织起源组成的肿瘤进行研 究时 , 这个问题是很难避免的。
引用:
1 .Battifora H.The multitumor (sausage)ti ssue block :novel method for immunohistochemical antibody testing.Lab Invest , 1986 , 55:244-248. 2 .Kononen J , Bubendorf L, Kallioniemi A , et al.Tissue microarrays for high-throughput molecular profiling of tumor specimens.Nat Med , 1998 , 4 :844-847.
3. Moch H , Kononen T , Kallioniemi OP, et al.Tissue microarrays :what will they bring to molecular and anatomic pathology? Adv Anat Pathol , 2001 , 8:14-20.
4 .Ekins R, Chu FW.Microarrays :their origins and applications.Trends Biotechnol , 1999 , 17 , 217-218.
5. 周小鸽 . 张颈松 . 张小平 . 等 <组织芯片技术在检测正常组织和肿瘤组织抗原表 达中的应用=""><中华病理学杂志 .3443.58w8="">8N8>3<>
