范文一:胶体金试纸的原理
双抗体夹心法原理
以FABP为例(检测抗原)
阳性反应
Y1=F14A(标记了胶体金)
Y2=F104B(固定在NC膜上即T线)
Y3=羊抗鼠IgG(固定在NC膜上即C线) 此方法较常用,主要用于较大分子量的蛋白(抗原)的检测。要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。也有个别的检测项目是双抗原夹心检测抗体的,原理类似。
竞争法原理
以吗啡为例(检测抗原)
阳性反应
Y1=胶体金标记的吗啡单抗
Y2=吗啡-BSA偶联物
Y3=羊抗鼠
此方法主要用于小分子抗原(毒品、农药、肽链等)的检测。由于抗原分子量小不能直接固定于NC膜上,常常用化学方法把小分子偶联到BSA等大分子物质上再固定于NC膜上。此结果与双抗原夹心法相反,阴性CT两条都是红线,阳性只有C线一条红线。
范文二:胶体金法的定义和分类
胶体金是一种常用的标记技术, 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型 的免疫标记技术, 有其独特的优点。 近年已在各种生物学研究中广泛使用。 在临床使用的免 疫印迹技术几乎都使用其标记。 同时在流式、 电镜、 免疫、 分子生物学以至生物芯片中都可 能例用到。
1971年 Faulk 和 Taytor 将胶体金引入免疫化学, 此后免疫胶体金技术作为一种新的免 疫学方法, 在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。 目前在医学检验中的应用主要是免疫 层析法 (immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法 (Dot-immuogold filtration assay DIGFA) ,用于检测 HBsAg、 HCG 和抗双链DNA抗体等,具有简单、快速、准确和无污染等 优点。
免疫胶体金技术的基本原理:
胶体金是由氯金酸 (HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、 鞣酸等作用下, 可 聚合成一定大小的金颗粒, 并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态, 形成带负电的疏水胶 溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷, 可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合, 由于这种结合是静电结合, 所以不影响蛋白 质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外, 还可以与许多其它生物大分子结合, 如 SPA 、 PHA 、 ConA 等。根据胶体金的一些物理性状,如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应,加上结合物 的免疫和生物学特性, 因而使胶体金广泛地应用于免疫学、 组织学、 病理学和细胞生物学等 领域。
胶体金标记, 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。 吸附机理 可能是胶体金颗粒表面负电荷, 与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。 用还原 法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、 也就是不同颜色的胶体金颗粒。 这种球形的粒子 对蛋白质有很强的吸附功能,可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗 生素、 激素、 牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合, 因而在基础研究和临床实验中成为非 常有用的工具。
免疫金标记技术 (Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度 的特性, 在金标蛋白结合处, 在显微镜下可见黑褐色颗粒, 当这些标记物在相应的配体处大 量聚集时, 肉眼可见红色或粉红色斑点, 因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中, 这 一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大,称之为免疫金银染色。
常用的免疫胶体金检测技术:
(1)免疫胶体金光镜染色法
细胞悬液涂片或组织切片, 可用胶体金标记的抗体进行染色, 也可在胶体金标记的基础 上, 以银显影液增强标记, 使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面, 可明显增强胶体 金标记的敏感性。
(2)免疫胶体金电镜染色法
可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合,然后进行负染。 可用于病毒形态的观察和病毒检测。
斑点免疫金渗滤法
(3)应用微孔滤膜(如膜)作载体,先将抗原或抗体点于膜上,封闭后加待检样本, 洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。
(4)胶体金免疫层析法
将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上, 胶体金标记试剂 (抗体或单克隆抗体) 吸 附在结合垫上, 当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后, 通过毛细作用向前移动, 溶解结 合垫上的胶体金标记试剂后相互反应, 再移动至固定的抗原或抗体的区域时, 待检物与金标 试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留, 聚集在检测带上, 可通过肉眼观察到显色结 果。该法现已发展成为诊断试纸条,使用十分方便。
快速金标试剂 技术是将特异的抗体先固定于酸类纤维素膜的某一区带, 当该干燥的酸类 纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后,由于毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移
动至固定有抗体的区域时, 样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合。 同时利用金粒具 有高电子密度的特性, 在金标蛋白结合处。 当这些标记物在相应的配体处大量聚集时, 肉眼 可见红色的斑点。 既为快速的金标检测方法原理。 生产快速而精确试剂, 要点在于所采用的 单克隆抗体、多元克隆抗体、抗原、 半抗原、蛋白嵌合物及胶体金等原料的灵敏性及特异性 等是否能达到最高的标准,此为金标试剂的质量之最重要的标准。
胶体金是金的水溶胶;胶体金法是指以胶体金为显色标记物。
简单解释:测试的原理是胶体金(直径 100纳米以下的金颗粒,在水中可以稳
定悬浮) 可以结合在蛋白质上作为标记, 且不影响蛋白质的活性 (在这里是和抗 原结合的能力) 。并且当胶体金聚集沉淀的时候会显红色(这是由于聚集而颗粒 变大的光学效应) 。
首先从那个图上可以看到, 试纸从左到右分别是样品区, 警戒线, 带有胶体金标 记的 HCG 抗体 1,检测线(固定的 HCG 抗体 2) ,质控线(固定的抗 HCG 抗体 1的抗体,我称为抗体 3) ,吸水材料。
然后插入尿液自然是为了取样,不能超过警戒线是因为否则会将 胶体金 +抗体 1溶入尿液流失。平放,尿液由于毛细作用会渗向右边,经过胶体金 +抗体 1区, 结合抗体形成 胶体金 +抗体 1+HCG; 继续向右, 此时液体中有 胶体金 +抗体 1+HCG和 胶体金 +抗体 1, 经过抗体 2区, HCG 结合抗体 2,使得 胶体金 +抗体 1+HCG被固 定下来(由于抗体 2是固定的) ,胶体金聚集显色; 没有结合 HCG 的 胶体金 +抗 体 1继续向右, 被抗体 3捕获固定, 在质控线显色 (这个是为了检测抗体 1活性 如何,如果不显色,说明抗体 1失活或者胶体金出了问题,试纸不能用了。
范文三:胶体金法
摘要免疫胶体金技术是四大免疫标记技术之一,问世二十多年来发展十分迅速,在生物医学各研究领域特别是在医学检验中得到了日益广泛的应用。本文从胶体金技术的基本原理、制备方法、标记技术和实际应用等几个方面对胶体金技术作了较系统介绍。
1971年Faulk 和Taytor 将胶体金引人免疫化学,此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法,在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法( immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(D ot-immuogold filtration assay
DIGFA) ,用于检测 HBsAg 、HCG 和抗双链DNA抗体等,具有简单、快速、准确和无污染等优点。
免疫胶体金技术的基本原理
氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金标记,实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能,可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素(antibiotic)、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合,因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中,这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大,称之为免疫金银染色。
胶体金的制备方法
胶体金的制备一般采用还原法,常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。下面介绍最常用的制备方法及注意事项。
1、玻璃容器的清洁:玻璃表面少量的污染会干扰胶体金颗粒的生成,一切玻璃容器应绝对清洁,用前经过酸洗、硅化。硅化过程一般是将玻璃容器浸泡于5%二氯二甲硅烷的氯仿溶液中1分钟,室温干燥后蒸馏水冲洗,再干燥备用。专用的清洁器皿以第一次生成的胶体金稳定其表面,弃去后以双蒸馏水淋洗,可代替硅化处理。
2、试剂、水质和环境:氯金酸极易吸潮,对金属有强烈的腐蚀性,不能使用金属药匙,避免接触天平称盘。其1%水溶液在4℃可稳定数月不变。实验用水一般用双蒸馏水。实验室中的尘粒要尽量减少,否则实验的结果将缺乏重复性。
金颗粒容易吸附于电极上使之堵塞,故不能用pH 电极测定金溶液的pH 值。为了使溶液pH 值不发生改变,应选用缓冲容量足够大的缓冲系统,一般采用柠檬酸磷酸盐(pH3~
5.8) 、Tris-HCL (pH5.8~8.3) 和硼酸氢氧化钠(pH8.5~10.3) 等缓冲系统。但应注意不应使缓冲液浓度过高而使金溶胶自凝。
3、柠檬酸三钠还原法制备金溶胶:
取0.01%氯金酸水溶液100ml 加热至沸,搅动下准确加入1%柠檬酸三钠水溶液 0.7ml ,金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为紫红色,继续煮沸15分钟,冷却后以蒸馏水恢复到原体积,如此制备的金溶胶其可见光区最高吸收峰在 535nm ,A1cm/535=1.12。 金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关,一旦颗粒大小发生变化,光散射也随之发生变异,产生肉眼可见的显著的颜色变化,这就是金溶胶用于免疫沉淀或称免疫凝集试验的基础。 金溶胶颗粒的直径和制备时加入的柠檬酸三钠量是密切相关的,保持其他条件恒定,仅改变加入的柠檬酸三钠量,可制得不同颜色的金溶胶,也就是不同粒径的金溶胶,见附表。 附表 100 ml 氯金酸中柠檬酸三钠的加入量对金溶胶粒径的影响1%柠檬酸三钠ml 0.30 0.45 0.70 1.00 1.50 2.00金溶胶颜色蓝灰、紫灰、紫红、红、橙红、橙吸收峰(nm) 220 240 535 525 522 518径粒(nm) 147 97.5 71.5 41 24.5 15
4、柠檬酸三钠-鞣酸混合还原剂:用此混合还原剂可以得到比较满意的金溶胶,操作方法如下:取 4ml 1%柠檬酸三钠 (Na3C6H5O7.2H2O),加入0~5ml 1%鞣酸,0~5ml 25mmo/L K2CO2(体积与鞣酸加入量相等),以双蒸馏水补至溶液最终体积为20ml ,加热至60℃取1ml 1%的 HAuCl4,加于79ml 双蒸馏水中,水浴加热至60℃,然后迅速将上述柠檬酸-鞣酸溶液加入,于此温度下保持一定时间,待溶液颜色变成深红色(约需0.5~1小时) 后,将溶液加热至沸腾,保持沸腾5分钟即可。改变鞣酸的加入量,制得的胶体颗粒大小不同。
5、白磷还原法:在120ml 双蒸馏水中加入1.5ml 1%氯金酸和1.4ml 0.1mol/L K2CO3,然后加入 1ml 五分之一饱和度的白磷乙醚溶液,混匀后室温放置15分钟,在回流下煮沸直至红褐色转变为红色。此法制得的胶体金直径约 6nm ,并有很好的均匀度,但白磷和乙醚均易燃易爆,一般实验室不宜采用。
要得到大小更均匀的胶体金颗粒,可采用甘油或蔗糖密度梯度离心,经分级后制得胶体金颗粒直径的变异系数(CV)可小于15%。
免疫胶体金制备
1、蛋白质的处理:由于盐类成分能影响金溶胶对蛋白质的吸附,并可使溶胶聚沉,故
致敏前应先对低离子强度的水透析。必须注意,蛋白质溶液应绝对澄清无细小微粒,否则应先用微孔滤膜或超速离心除去。
一般情况下应避免磷酸根离子和硼酸根离子的存在,因为它们都可吸附于颗粒表面而减弱胶体金对蛋白质的吸附。
2、蛋白质最适用量的选择:将待标记的蛋白质储存液作系列稀释后,分别取0.1ml(含蛋白质5~40ug) 加到 1ml 胶体金溶液中,另设一管不加蛋白质的对照管,5分钟后加入0.1ml 10%NaCl 溶液,混匀后静置2小时,不稳定的金溶胶将发生聚沉,能使胶体金稳定的最适蛋白量再加10%即为最佳标记蛋白量。
3、标记:在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的,在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量最大。
下述标记步骤最为常见:
①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH(标记SPA时调到pH6.0) 。 ②于100ml 金溶胶中加入最佳标记量的蛋白质溶液(体积为2~3ml ),搅拌2~3分钟。 ③加入5ml 1%PEG20000溶液。 ④于10000~100000g 离心30~60分钟(根据粒径大小选择不同离心条件),小心吸去上清液(切忌倾倒)。 ⑤将沉淀悬浮于一定体积含0.2~0.5mg/ml PEG20000的缓冲液中,离心沉淀后,再用同一缓冲液恢复,浓度以 A1cm/540nm=1.5左右为宜,以 0.5mg/ml叠氮钠防腐,置4℃保存。 ⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于Sephadex G-200柱进行凝胶层析分离纯化,以含 0.1%BSA的缓冲溶液洗脱。通常用IgG 包被的金溶胶洗脱液pH 为8.2,以A蛋白包被的金溶胶洗脱液为pH7.0。 以上操作中应注意,一切溶液中不应含杂质微粒,可用高速离心或微孔滤膜预处理。
胶体金的稳定性及免疫胶体金的贮存
胶体金具有很高的动力学稳定性,在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢,可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。
金溶胶必须有少量电解质作稳定剂,但浓度不宜过高。高浓度亲水性非电解质能剥去胶粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物质促使溶胶凝聚,但一定量的高分子物质反而可增加溶胶稳定性,如蛋白质、葡萄糖、PEG20000等的加入有良好的稳定效果。
当金溶胶吸附蛋白质后,溶胶的稳定性随溶液pH 而变化,而这种变化又取决于吸附蛋白质的等电点,如ConA ,过氧化物酶等,当pH 较低时保持稳定,提高pH 则显得不稳定,接近等电点或略高时又变得稳定了。标记后的胶体金溶液可用0.2~0.5mg/ml PEG20000 作
为稳定剂。在4~10℃贮存数月有效,不宜冰冻。贮存中可能会发生程度不同的凝聚,可离心除去。
免疫胶体金的应用
1、胶体金在电镜水平的应用
胶体金应用电镜水平的研究最早,发展最快,应用最广泛。其最大优点是可以通过应用不同大小的颗粒或结合酶标进行双重或多重标记。直径为3~15nm 胶体金均可用作电镜水平的标记物。3~15nm 的胶体金多用于单一抗原颗粒的检测,而直径15nm 多用于检测量较多的感染细胞。
胶体金用于电镜水平的研究,主要包括:①细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内抗原的检测。③组织抗原的检测。
金标记在电镜水平的应用,主要方法包括:包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记技术和原位杂交技术等。
实验证明,该法样本用量少、检测速度快、对比明显、操作简单、敏感性和特异性高,既可用于抗原检测,也可用于抗体检测,因此,可同时适用于科研和诊断。
2、胶体金在光镜水平的应用
胶体金同样可用做光镜水平的标记物,取代传统的荧光素、酶等。各种细胞涂片、切片均可应用。主要用于:①用单克窿抗体或抗血清检测细胞悬液或培养的单层细胞的膜表面抗原。②检测培养的单层细胞胞内抗原,③组织中或亚薄切片中抗原的检测。 胶体金用于光镜水平的研究,可以弥补其它标记物不可避免的本底过高和内部酶活性干扰等缺点。 3、胶体金在流式细胞仪中的应用: 应用荧光素标记的抗体,通过流式细胞仪计数分析细胞表面抗原,是免疫学研究中的重要技术之一。但由于不同荧光素的光谱相互重叠,区分不同的标记困难,因此必须寻找一种非荧光素标记物,用于流式细胞计数。这样可以同时进行几种标记。该标记物必须能够改变散射角,胶体金可以明显地改变红激光散射角,因而可以作为流式细胞仪的标记物之一。
4、凝集试验:单分散的免疫金溶胶呈清澈透明的溶液,其颜色随溶胶颗粒大小而变化,当与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚,溶胶颗粒极度增大,光散射随之发生变化,颗粒也会沉降,溶液的颜色变淡甚至变成无色,这一原理可定性或定量地应用于免疫反应。 5、免疫印迹技术(immunoblotting):免疫印迹是一种较新的免疫化学技术。用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离,得到的区带转移至硝酸纤维素膜,然后用酶免疫法(或免疫荧光、RIA)进行定量。
免疫胶体金也可用于该法的定量。转移后的硝酸纤维素膜与某特异性的抗体保温后,再与经葡萄球菌A蛋白致敏的胶体金温育,彻底洗去多余的胶体金,根据膜上胶体金颗粒颜色深浅可测知样品中的特异性抗原。 利用金颗粒可催化银离子还原成金属银这一原理,采用银显影剂增强金颗粒的可见性,更可大大提高测定灵敏度,检测下限可低至 0.1ng ,这种免疫金银染色法应用已日趋广泛。 由于胶体金免疫印迹技术简便、快速,且有相当的高的灵敏度,在临床免疫诊断上有很大的应用潜力。
6、胶体金在肉眼水平的应用 胶体金取代传统三大标记物,用于肉眼水平的免疫检测中。除了胶体金本身具有的特点外,还有以下优点:①试剂和样本用量极小,样本量可低至1~2ul ;②不需γ-计数器、荧光显微镜、酶标检测仪等贵重仪器,更适于现场应用;③没有诸如放射性同位素、邻苯二胺等有害物质参与;④实验结果可以长期保存;⑤时间大大缩短,提高了检测速度。
金标过程中,无共价键形成,是一定离子浓度下的物理吸附。因此几乎所有的大分子物质都可被金标记,标记后大分子物质活性不发生改变。实验结果表明,胶体金的敏感性可达到 ELISA 的水平。而结合银染色时,检测的敏感性更大大提高。
胶体金在免疫层析快速诊断技术中的应用
免疫层析法(immunochromatography)是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术,其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带,当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后,由于毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移动至固定有抗体的区域时,样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合,若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色,从而实现特异性的免疫诊断。 早孕诊断用的免疫层析试纸条(通常又叫尿妊纸条)的装配结构见图一。
装配方法:在塑料底板上分别将吸尿用玻璃纤维、冻干金标记抗α-HCG 玻璃纤维、已固定有抗β-HCG 抗体的NC 膜及硬质吸水滤纸按图装配,配件与塑料底板的结合可用双面胶或其它粘性材料粘接。装配好的纸板按纵向剪切,裁成宽度为4mm 的条状,即为尿妊用纸条。
本法检测速度快,一般一两分钟可出结果;灵敏度高,可达50IU/L;好的试纸条结果也是准确可靠的,这是其所以能在尿妊诊断中得到广泛应用的主要原因。尿妊试纸条的快速特性来源于胶体金免疫层析法的固有特性,但与原材料选择特别是NC 膜的孔径大小密切相关,准确性取决于抗β-HC G的特异性。
金标尿妊纸条虽然好用,但在使用中也必须注意以下几个方面:一是温度,试纸条虽然
可在室温保存,但大批暂时不用的试纸条还是应该放在4℃保存,以免抗体失效,从冰箱刚取出的试纸条则应待其恢复至室温,然后才打开密封,可避免反应线模糊不清。二是正确操作,一般的操作方法是在试纸条的吸尿玻璃端滴入2滴(约100微升)尿液,或将吸尿端直接插入标本中,深度约10~15毫米20秒,取出后平放,这种方法比较麻烦且容易造成污染。我们的方法是取尿标本约0.5ml 加入小试管中,然后插入试纸条,待1~2分钟反应带清晰后观察结果。
胶体金在快速斑点渗滤技术中的应用
ELISA法在临床实验室已得到普遍的应用,特别是用于各型肝炎标志物的检测。但ELISA法由于操作程序复杂,时间较长,给实验室带来不便。因此出现一步法快速检测试剂盒,虽可提高检测速度,但有出现假阴性结果的弊端。ELISA法需时较长的主要原因,是由于液相中的抗原(或抗体)需经扩散才能与固相上的抗原或抗体反应不适当地缩短反应时间,将使灵敏度降至临床要求以下。为满足临床快速检测的需要,近年来发展了多种简便、快速的免疫学检测方法,快速斑点渗滤法即为其中一种,其标记物质用胶体金即称为快速斑点免疫金渗滤法(Dot-immunogold filt ration assay),又称滴金免疫法。
快速斑点渗滤法的基本原理仍是间接法或夹心法。间接法测抗体:固定于膜上的特异性抗原+标本中的相应抗体+金标记的抗抗体或SPA显色。夹心法测抗原:固定于膜上的多克隆抗体+标本中待测抗原+金标记的特异性单克隆抗体显色。
结果判断:快速斑点免疫金渗滤法在操作完成后即可直接观察结果。根据测定模式的不同可有以下不同的判定结果。
快速斑点免疫金渗滤法检测速度快,结果观察一目了然,已应用于多种临床检测项目。
以上分析可以看出,胶体金标记技术是继三大标记技术之后,又一较为成熟且已得到广
泛应用的免疫标记技术。
回复
所谓竞争,就是检测线(T 线)包被的抗原和待检样品中的抗原竞争结合金标抗体,如果待检样品中无抗原存在,金标抗体在泳动过程中先和T 线包被抗原结合,形成肉眼可见红线,多余金标抗体继续泳动和质控线(C 线)包被的羊抗鼠二抗结合,也形成一条肉眼可见红线,此结果判为阴性(双红线判为阴性,和非竞争法相反);如果待检样品中有抗原存在,则样品中的抗原、包被抗原竞争和金标抗体结合,包被抗原被抑制,样品中的抗原和金标抗体结
合后继续泳动,直到和C 线的二抗再次结合,此时,T 线不显色,而C 线显红色,结果判为阳性(T 线无色,C 线红色,为阳性);如果结果中C 线不显色,则试纸条已报废,不能再使用。
基本明白了,但是对于任何金标试纸,都是有检测灵敏度的。举例一个5ppb 的试纸,此5ppb 的灵敏度原理上是不是应该体现在金标抗体上。那若是阴性标本,如果" 多余金标抗体继续泳动和质控线(C 线)包被的羊抗鼠二抗结合" ,那此怎会有多余的金标抗体呢。还是有些不明白质控线如何显色?
金标垫上金标抗体的量,检测线上抗原的量都很关键。如果两者比例不合适的话,对于阴性标本,检测线上的抗原把金标抗体全结合了,就没有多余的金标抗体继续泳动与质控线上的二抗结合,导致C 线较弱或无。对于阳性样品,如金标抗体过量导致竞争不完全,除了与样品中的抗原结合外,还能与检测线上的抗原结合,这样会造成假阴性。
要做到有较好的灵敏度和漂亮的C 线,T 线的金标试纸,好多关键的量都的摸索。
范文四:胶体金蛋白原理
【求】关于胶助体金理的问原?题
素菜鸟偶但,是胶体对金术技很兴趣,有几个小白感题,希问望位D各能抽X解答下空
1
液血在品样上垫如何分离,在NC膜上动流血的液被中是和掉了细胞红,么红细胞样品垫在上如是何中和的被呢?
2
被包抗或原抗体是如被固何定在CT线位的置如果 金体胶在T线处和抗C结原合线后,成还有法使线条办散消
么
3把量稀释液少置在吸放中干管燥后吸内壁管出大现量色白附物 着是是稀不液中含有释NH2aO4P 干燥脱后成为的聚水酸磷盐
呢4
标试本验出中现阴线条性完整或浅不的原是因么什呢?是不因为血液加是样过多量成的造
-------------------------------------------------------------------------------
-.对1于红细胞,过让通细胞在样红品垫中集,凝滤过掉红胞.细
2.白蛋硝和酸维素纤能够结合是的一.般况下,情检线成测后是不会消线散.如果的子离强很大度,体系亲水极性强可是慢以消慢散.的
3.于对个这题问我不很明白.不是好意思.4
.于对个这问题,因很原,多线不条整是完什意么思?一检般测浅的线原因 标记是问.t线题被包浓度低金少或,体系者HP对不等多种因原.-
-------------------------------------------------------------------------------
coloildogl0d0 w7rtoe:
2
.白蛋硝和纤酸素维能是结合够的.一般情况下,测线成检后是线会不消的.散果如离子度强很大体,系水性亲极是强以可慢慢消的散.
是偶白小层,析成後完直接NC膜上往稀释液洒,后然现出很多了规则不的红线条扩散,膜都整是请,这些问规不红则条是胶线金体是还血中液红胞细跑了N到膜上呢?如果CC线T成後形,接往直TC线处加或稀水释液使能其扩散?么
-------------------------------------------------------------------------------
-析层完后成直接後N往膜上C洒稀液释,什是么意思.你的的是目么,什我是不很白.明
--------------------------------------------------------------------------------没什么
目的就是,问想明白。我的意思就个出是果後把结稀液释接直放膜上,到如CT线果成形直後往线上接撒释液稀 能那C使T线条扩散失消?么
-------------------------------------------------------------------------------
-这说很麻么烦 可pm以
--------------------------------------------------------------------------------就第二个问
题:抗原抗结合是特体性异,的一般不容洗易。即掉使掉说洗他明本身特们异性够——不——和度,纯还蛋白本身的有性质关有
-。-------------------------------------------------------------------------------
谢谢上各位楼了还,有些是疑问
抗
体抗应原是只该被包在TC线处吧是喷?到上膜么的如?保证何确准的喷一成条线呢?
为玻何上纤金
的标+抗会层析原不而会定固于NC膜,而被包抗原会和的CN结合固膜于定上膜呢---
----------------------------------------------------------------------------
-个就这要调整你体的了,系如让何你的标金记的抗原不会和发膜生吸附或者,尽量低他们之降的间附了。吸不还要没等到你的有层金析到测线检已就经膜结和了。合这通样过节调系统控来。制-----
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个就这调要你整的体系了,如让你的金标记的抗何不会和原发膜生附,或吸尽量降者低他们间之吸附了。要不还没的有到等的金你析到层检测线已经就和结合膜了。这样通过节系调来统控。制
金标层
析成完后整条膜,会变都成淡的淡色,这淡红色是红造金的么,成这个是不说明调是整体系只能是少吸减附,是但肯还是定会和有膜吸的附??
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封闭物.不够质
2 .子强度离过低3.标
记不完全有,金裸-
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随从便网找上张H了I胶体V盒金的图,片请整张膜问呈上淡红的是色您所说的因么原大批?生产的量品应该成会出不这现的样题问吧??-
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-这全是血检测,后的有血来胞细析层到上膜成形的不,是残留的体金。如果膜最胶且淡有色红,流是动性不,好胶是体聚金,集或面表性剂活不够关有
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这全血是的测检后,有来血细层析到胞膜上形成,的是不残的胶留体。金如膜最果有淡红色,是流动且不好,是胶体金聚集,性表面活性剂不或有够关。
很纳
闷这问个,如果是血红细胞题曾析到膜的话上,该应会些有不规则小的条,线不会成而么均匀这的淡色红?啊
而不是且说红细在样品胞上就被过滤垫掉么了。
。
貌似使用即水话的,会也有红液色层析体最,后膜还是上成会这样个,所以偶子很奇怪就,底到什是么成了这造样的淡红色
--------------------------------------------------------------------------------如果
用水测检,有这样也的淡色,红就是那金太造成多的.先这个首是规在时间定读结果吗?一的般一始会出开这现的问样,但题间长时些一这,些淡红色应会该慢慢消失.的果始终有如的话,就是太多了.浓金没有度优好化,如这个红色不影果检测结果,响也是可以接受的.
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感-楼谢上。的。
淡
色红间时了的确长慢慢消会。。不过时散间长
了,这些金体应该胶会再不析了吧层。这。胶些金体散到消里哪去了呢?
另再外一下问,有时候些析完成后,层C膜两N边侧会出现红缘色这,个不是是因边为缘干速度燥,快体金胶散扩到边形成的呢?
缘
有胶体金还用量正的常况下,情析时层会会出不淡淡现的红呢?
色
再次万分感谢上楼不其烦厌的回偶答的白问题小
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淡-色时间红了长慢慢消会散,胶体不金是散消了,而被是吸到附吸水上垫了.不知你有有注意没到:后最水垫一吸般都是红的?
NC膜两色边侧会缘现出红,可色是能因为纸条试有切没好,两边缘比较粗侧,引糙起颗金的吸粒!
附--------------------------------------------------------------------------------
如果你真正过全血做就,会看这种到象现你在里。面加了面表活性了剂?这吗最基本是问题的知,识源于来实践--
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这-种况情也遇到过,金垫上的我象金红一样弥丝在散nc膜,上一过后阵集在c聚线,慢慢上膜上的颜的色就变浅,了直到水吸纸把色红收吸为止这种现。象怎么造成是的呢可?可以解决不?请呢大多指点,家
范文五:胶体金检测试剂盒原理 布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒(胶体金法)
布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒(胶体金法)
前言概述:
布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌(Brucella )引起的一种人畜共患性传染病。布鲁氏菌病流行于世界各地,我国主要流行于内蒙、东北,西北等牧区,其中以羊布氏杆菌病最为常见,其次是牛种布鲁氏菌。布鲁氏杆菌的宿主是家畜、家禽和野生动物,与人类有关的传染源主要是羊、牛及猪,其次是犬,一般通过接触感染的动物或者吃被感染的食物传播给人类,感染者临床症状主要表现为反复发作的发热,伴有多汗、游走性关节痛或乳房胀痛、神疲乏力。故又称为波浪热或地中海弛张热。布鲁氏杆菌快速检测试剂盒可快速检测对人或哺乳动物感染布鲁氏菌2周后会出现特异性血清抗体。生活工作在牧区、或去过牧区、或接触过来自牧区动物的患者出现
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不明原因发热、肌痛、关节疼痛等全身不适症状,怀疑为布鲁氏菌感染者,可用本试剂盒检测。疑是布鲁氏菌抗体哺乳动物,也可用本试剂盒检测。布鲁氏杆菌抗体快速检测试剂盒对布鲁氏菌病的诊断、治疗、预防以及最终控制均具有重要的意义~
检验原理:
布鲁氏杆菌抗体快速检测试剂盒利用了布鲁氏菌多糖抗原包被在硝酸纤维膜上,用于捕捉血清标本中抗布鲁氏菌抗体,用标记了SPA (金黄色葡萄球菌蛋白A )的免疫胶体金探
http://www.wenku1.com/news/14D6303BAED03F9E.html针进行检测,可用于人或动物布鲁氏菌感染诊断。
试剂盒组成:
1、布鲁氏杆菌抗体快速检测卡
2、样本稀释液(生理盐水)
3、说明书
操作步骤:
1、取待检人或动物血清标本20μl ,加生理盐水400μ(l 即按1:20稀释),作为检测液备用。
2、撕开外包装,吸取上述检测液,滴加3-4滴于试剂圆孔
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中,2分钟后开始观察结果,15分钟终止观察。
结果判定:
1、阳性结果:试性剂显示窗口“C ”(对照)和“T ”(检测)处出现2条红色沉淀线为布鲁氏菌抗体检测阳性。
2、阴性结果:试剂显示窗口“C ”处出现1条红色沉淀线为布鲁氏菌抗体检测阴性。
3、无效结果:试剂显示窗口“C ”处未出现红色沉淀线,此情况下无论“T ”处是否出现沉淀线,均判为试剂失效。
产品相关信息:
包装规格:10T/包,单人份独立包装。
储存条件:4-25?避光保存,不得冻存。
有效日期:24个月。
生产企业:广州市标健生物科技有限公司
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