无耻的马赛克
土霉素属于四环素类的抗生素,是一种抑菌剂,抑制水中硝化细菌菌群生长的同时.
土霉素的副作用
消化系统:胃肠道症状胃肠、腹不适，腹胀，腹泻,偶有胰腺炎，食管炎和食管溃疡发生。
肝毒性,通常为脂肪肝变性,对原有内伤肾功能损害的龟易发生肝毒性,但肝毒性亦可发生于并无上述情况的龟。
血液系统,偶可引起溶血性贫血、血小板减少、中性粒细胞减少和嗜酸粒细胞减少。
二重感染,长期应用本品可发生耐药金黄色葡萄球菌、革兰阴性杆菌和真菌等的消化道、呼吸道和尿路感染,严重者可致败血症。
土霉素的联用禁忌
1.其他抗生素,联用分别给药。
2. 5%葡萄糖、0.9%氯化钠,盐酸土霉素可与大多数常用静注剂配伍,但在P H值>6,特别是含钙溶液中不稳定。
3.含人参、柴胡、甘草制剂、黄柏、黄连及葛根,联用提高四环素类药物疗效,降低毒副作用。
4.酸性食物、饮料和中药,联用促进四环素类在胃肠道吸收,增强四环素类抗菌作用,但山楂易与四环素类络合,减少吸收,不宜联用。
5.青霉素类,四环素类属快速抑菌药,干扰青霉素类对繁殖期细菌作用,避免同用。
6.红霉素、利福平、异烟肼、地西泮等具有肝毒性药物,联用干扰这些药物的肝肠循环,影响疗效,增强肝毒性,不宜联用。
7.杆菌肽、多黏菌素等肾毒性药物,联用肾毒性加剧。
8.强利尿药,联用肾毒性加重。
9.葡萄糖液,联用减少吸收,降低疗效。
10.肌松药,联用加重呼吸抑制反应。
11.抗惊厥药,联用使脱氧土霉素血药浓度降低显著,其他四环素类不受影响。
12.碳酸氢钠,联用使四环素类吸收减少,活性降低。
13.含金属离子钙、镁、铝、铋、铁等的药物(包括中草药),联用与四环素类形成不溶性络合物,减少吸收,降低疗效。a.白矾,联用生成难溶性络合物,降低四环素类的抗菌作用。b.绛矾丸(含绛矾、苍术、陈皮、厚朴、甘草、红枣),联用生成难溶性络合物,降低四环素类的抗菌作用。c.煅牡蛎(主含碳酸钙),联用减少四环素类吸收,降低抗菌活性。
14.虎杖(含鞣质、黄酮类、大黄素、虎杖苷等),联用生成难溶性络合物,降低四环素类的抗菌作用。
15.黄连上清丸(含黄连、栀子、黄芩、防风、练球、石膏等),联用生成难溶性络合物,降低四环素类的抗菌作用。
16.解热丸(含胆南星、竹黄、青礞石、猪牙皂等),联用生成难溶
性络合物,降低四环素类的抗菌作用。
17.十灰散(大蓟、小蓟、荷叶、侧柏叶、茜草根、白茅根、牡丹皮、山楂、大黄、棕榈皮),炭类中药能吸附四环素,联用使之疗效降低。
18.痧气散,联用胃酸降低,影响四环素类发挥疗效。
19.银翘解毒片(含金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗、淡竹叶、芦根、甘草),联用使银翘解毒片的作用减弱。
20.保和丸(含山楂、连翘、六曲、半夏、陈皮、莱菔子、麦抑制保和丸活性,使其功效减弱或消除。
21.联用降低四环素类药物抗菌效果。
22.四季青(主含黄酮类四季青素等),联用使四环素类抗菌活联用显著降低,肝毒性增加。
23.牛奶、奶制品,联用显著降低四环素类药物的吸收,影响疗效。
24.碱性食物(如打饼干、汽水、啤酒等),联用使四环素类吸收减少,疗效降低。
[土霉素的副作用_土霉素的联用禁忌]
土霉素钙预混剂的配伍应用
土霉素钙预混剂的配伍应用
一、正大土霉素钙常用增效配伍
1、预防肠道疾病:硫酸新霉素、硫酸粘杆菌素、大观霉素、安普霉素、磺胺二甲等。
2、预防呼吸道疾病:泰乐菌素、吉他霉素、林可霉素、泰妙菌素等。
3、促生长:黄霉素、杆菌肽锌、维吉尼亚霉素等。
4、预防附红细胞体病:阿散酸、洛克沙砷等。
二、正大土霉素钙配伍应用推荐
建立健康肠道:10-50ppm 土霉素钙+2-20ppm硫酸粘杆菌素;
防治慢性支气管炎:10-50ppm 土霉素钙+80-330ppm吉他霉素;
中小猪减少猪应激:10-50ppm 土霉素钙+4-40ppm杆菌肽锌;
防治坏死性肠炎:10-50ppm 土霉素钙+4-10ppm恩拉霉素;
促生长提高饲料报酬:10-50ppm 土霉素钙+5-20ppm维吉尼亚霉素。
土霉素
北极嘉鱼 土霉素
过量的土霉素用离心机在2700*转一个小时的条件下从准备好的制剂中分离，上层的可以丢弃。量取140ml 体积的水加入到脂质体颗粒中，溶液经离心分离，2700*转 1.5小时，上层的丢弃。
这些颗粒（9.2g ）和9.2ml2%的na-藻酸盐混合（Protanal LF 10r40 RB;Protan Biopolymer, Drammen, Norway ）。这些溶液需要搅拌然后停滞10分钟来排除准备液中的空气泡。悬浮液用一个27-gauge 细管链接注入到一个10ml 的容器中，并喷洒加入0.5 m cacl2溶液，可以感应藻酸盐并使其冻结成。用这种方法，可以制成0.5-2.0mm 直径的脂质体\藻酸盐颗粒。2小时以后，把这些颗粒放在水中洗涤来除去盐分和多余的土霉素，然后储存在 4。C 的温度下一直到使用。颗粒中土霉素的浓度使得压碎的颗粒在水中悬浮和并利用SPE 和 HPLC来分析材料。发现土霉素的浓度一般是79.2-+7.9mgotc\g 颗粒（n=4），在使用前颗粒在水中的悬浮浓度100mg\otc\ml。
2、3 实验用鱼
健康的北极嘉鱼（S. alpinus L）重量514+-154g(平均+—误差) ，来自水产养殖研究站（Troms?, Norway.,）鱼保存在流通的纤维玻璃存水容器中。在4.2-8.6的温度下用含氧淡水供养，平均温度6.3. 鱼用商用饲料饲养。
2.4 实验程序
背动脉管的使用曾被Houston （1971）和 Soivio et al. （1972,1975）按一定的程序修改.. 鱼在空气充足的含有100mg\l MS-222和200mg\l碳酸氢钠的水中被麻醉。当鱼没有呼吸活动的时候，把他们从水中取出，称重，并固定在手术台上。插管是由一个35-cm 的聚乙烯管子构成（PE 50, intramedic non-radio-opaque, non-toxic; Clay Adams, NJ, USA），顶端是一个1-ml 的尖细的移液吸管由管子外头拉成，长大约5cm 被用来插入主动脉。
一个直径0.5mm 的吉他弦线放置在套管里面，管子由上颚插入通过第一和第二腮弓，并差插入主动脉大约2.cm ，成功插入主动脉之后，血液充满套管导致细线被移动。加上管夹放置血液流失，17-*2英寸，尖端穿过鼻孔并且尖端在套管的末端露出，移液管的尖端阻止套管从鱼的鼻孔和背动脉中拉出，当细线移动的时候套管被洗刷并存满肝素化（200 IErml.）的0.9%的盐分。溶液最后呈现红色。套管被上颚缝合。
在实验的过程中，Soivio et al 指出鱼被单独的封闭在流通的场所，可以静脉注射。土霉素的用法还取决于大动脉的套管在没有改变鱼类的自由流动的状态。这个场所由一个直径15cm 棕色的聚乙烯管子制的，长度60cm ，例外两端有15mm 网眼的尼龙网。用鱼静脉注射的实验用鱼可以从手术台上恢复正常，例外在给药前有一个礼拜的时间去适应场所。用于口服方式的实验用鱼可以在给药前恢复一个星期在一个500l 的水槽中，放置在样本的场所。带有无影响套管的鱼排除先前药物的影响的研究。
2.5 药物使用和取样
在用药前鱼需要绝食2天。定量用药1ml\kg体重。静脉注射的纪要方式直接套管到背主动脉，剂量10（n=6）-20(n=6)mgotc\kg体重。口服方式给药前鱼应该被缓慢的麻醉用ms-222。. 药物用添喂的方式用可以一次性使用的注射器添入胃中。剂量是50（n=70）-100(琼脂n=9：脂质体\藻酸盐n=3)mgtotc\kg体重。在给药之后鱼要被立即放在样本槽中。
由大动脉管中取样本大约600ul ，分别按1、4、8、12、24、48h, 并间隔一定的时间3到20天在静脉注射实验之前。用口服方式给药的话，血液样本在4、8、12、24、48、42、96h, 并在6-24天定期时间间隔在给药之后。在给50mg\kg otc 口服方式组中，额外的样本从4个间接的33天。在取样之前套管中的肝素溶液盐分要取出来并丢弃。血液离心2分钟在
1000*转下，得到的血浆保存在-20.C 下一直到分析的时候。
2.6 分析性程序
用Bjo ¨rklund 修订过的方对血浆中的土霉素进行分析，归于不同的分析设备，用药剂量，hplc 方法的色谱分析必须要校正以满足可以获得对称的数据和满意的分辨率在土霉素和四环素（tc 用内部标准）之间。Bjo ¨rklund 用固相萃取的方法获得了四环素相对比较低的恢复率在Bond Elut C18 columns。为了增加恢复性，洗涤的量从30减少到5ml ，流体体积从10减少到1ml. 通过减少洗涤量，一个好使的蒸发步骤也可以被排除。那么，用于现在研究的分析方法如下，血浆样本中加入标准的0.5ugtc 和10ml 低温的萃取剂，包含0.1m 的柠檬酸和0.2m 的disodium hydrogenphosphate（62:38）（酸碱度=4）也被加进去。样本摇动并用高频波处理5分钟，然后在4.C 下静止15分钟。把血浆样本转移到1mlBond Elut C18 SPE columns(萃取容器) ，可以被萃取剂5ml 的甲醇和2钠edta 分离激活分层。在样本流入塔器之后，用5ml 的水洗涤。土霉素和四环素被1ml0.01m 的有机草酸分离洗提并用10ui 小份洗出液量化加入相位HOLC 。每份血浆样本的分析要分两份执行。
HPLC系统包含一个标准的600E 系统控制器，和一个标准的717自动注射器，一个标准的484可变波长紫外线检测仪353nm 。实验反应用一个747型号的数据模块积分器记录。用Nova-Pak RP-C18 column（100=3.9 mm i.d）分离并在之前先用Guard-Pak （4.0 mm i.d）分离。色谱分析流动相包括14%的氰化甲烷和2氮二甲基酰胺还有80%0.01m的草酸（ph=2.1）并且需要有1ml\min的流速。HPLC 系统要在25c 的条件下操作。
土霉素的量化是在萃取的土霉素\四环素的基础上用构造的标准曲线获得。用峰值来比较土霉素和四环素在血浆样品中的水平。土霉素和四环素的收取回收率需要分析用来比较逢高而直接注射0.1-0.5ug\ml的methanolic 标准来分析峰值从而做出决定。检测范围由土霉素在血浆中的浓度且高效液相色谱法的三倍信号信噪比。 最低校准标准0.1ugotc\ml定量分析的极限。
2.7 药物动力学和统计分析
每条鱼以及每项处理都需要分期其血浆土霉素的浓度对比时间数据，并用非线性最小二乘法回归。药物动力学的计算机程序，软件体系结构分析法ii, 版本1.1（SAAM Institute, University of Washington, Seattle,WA, USA ）用来做处理运算。组中的通过口服10-20mg\kg获得的数据可以被三分割开放模型很好的描述。这个模型是基于残差平方和和最小Akaike 信息标准（AIC ）挑选出来的。所有的扩散过程假定遵循一级动力学。
Fig. 1. Semilogarithmic plot of plasma OTC concentration vs. time in Arctic charr ns6. after i.v.
administration of a single dose of 10 mgrkg body weight. Each curve represents data from one fish.
浓度时间曲线下面的面积（AU ）C 从0到无穷大的计算公式：AUC=A\a+B\b+C\g. 平均停留时间（MRT ）的决定公式：MRT=AUMC\AUC wumc是auc 的时间产品的绘图，例外血浆药物的浓度与相对时间范围从0到无穷大（Ritschel, 1992..）。
定量给药后血清浓缩的时间曲线不适用用电脑一级分摊模型值得的非线性最小二乘法。口服给药处理后的消除速率常数（k ）用消除曲线的末端部分来估计预测，至少含有六个小数点，土霉素的半衰期用以下公式估值：t 1\2= ln 2\k e.auc用梯形微积分法计算获得，包含最后的部分。口服方式的生物利用率百分比用血浆浓缩相对时间曲线的下面面积决定，用公式：
F=100+（AUCp.o.*Dose . ）\(AUC*Dose) .Dose\AUC的平均值来自10-20mg\kg的静脉注射研究。每条鱼的最高土霉素浓缩值和最高时间直接从浓缩相对时间曲线中读取。
所有的统计分析的基础准备均来自Mann –Whitney 的非参数测试， 用电脑程序 Statviewe SEq, version 1.04 （Abacus Concepts, Berke-ley, CA, USA）。显著性水平接近：p=0.05.药物动力学的数据的记录方式：平均值+-误差。
Fig. 2. Semilogarithmic plot of plasma OTC concentration vs. time in Arctic charr ns6. after i.v.administration of a single dose of 20 mgrkg body weight. Each curve represents data from one fish.
结果
3、1 分析方法
通过减少SPE 方法的洗涤量和流体量，血浆中土霉素和四环素的恢复数据分别从45.3"12.4% 和40.1"12.0% 到 83.0"8.9% 和 78.5"8.7%（n=10）。土霉素和四环素在HPLC 系统中的最小停留时间分别是3.07和3.59。Lod 的估值用0.05ug 土霉素\ml。紫外线检测仪的反应与土霉素的浓缩有很大的相关性（r=0.9985）且发现其线性范围从0.1-0.5ugotc\ml:loq用0.1ugotc\ml土霉素。三个样本的鱼用琼脂给药50mgotc\kg例外一个样本用100mgotc\kg含有浓聚物超过LOD 在LOQ 之下的脂质体\藻酸盐，浓聚物的测定数量用标准曲线的外推法获得。血浆样本中浓聚物超过5.0ugTOC\ml的需要用水稀释后使用。 Table 1
Pharmacokinetic parameters mean value"S.D.. for OTC after i.v. administration to Arctic charr Abbrevations:
A, B, C: zero-time plasma drug concentration intercepts of triphasic disposition curve;
C0:zero-time plasma concentration of OTC;
a, b: distribution rate constants;
g : elimination rate constant;
1r2a ,b , t1r2g : distribution half-lives and elimination half-life;
AUC: area under the concentration–time curve;
AUMC: area under the curve of a plot of the product of time and plasma drug concentration –time;
ClT: total body clearance;
Vda rea.: apparent volume of distribution;
Vdss.: apparent volume of distribution at steady state;
Vc : apparent volume of the central compartment; MRT: mean residence time.
3.2 静脉注射实验
致谢：
Acknowledgements
The deceased Dr. Knut Hjelmeland is acknowledged for valuable help and advice in initializing this study. The help of Professor Einar Jensen in adjusting the analytical
T. Haug, P.A. HalsrAquaculture 186 (2000) 175–191 189
methods is highly appreciated. The staff at the Aquaculture Research Station Troms?, Norway. is acknowledged for technical assistance and for providing fish to this study. 参考文献：
References
Abedini, S., Namdari, R., Law, F.C.P., 1998. Comparative pharmacokinetics and bioavailability of oxytetracycline
in rainbow trout and chinook salmon. Aquaculture 162, 23–32.
Amundsen, P.A., Klemetsen, A., 1988. Diet, gastric evacuation rates and food consumption in a stunted
population of Arctic charr, Salíelinus alpinus L., in Takvatn, northern Norway. J. Fish Biol. 33, 697–709.
Bj?rklund, H., 1988. Determination of oxytetracycline in fish by high-performance liquid chromatography. J.
Chromatogr. 432, 381–387.
Bjo ¨rklund, H.V., Bylund, G., 1990. Temperature-related absorption and excretion of oxytetracycline in
rainbow trout Salmo gairdneri R... Aquaculture 84, 363–372.
Bjo ¨rklund, H.V., Bylund, G., 1991. Comparative pharmacokinetics and bioavailability of oxolinic acid and
oxytetracycline in rainbow trout Oncorhynchus mykiss.. Xenobiotica 21, 1511–1520. Black, W.D., Ferguson, H.W., Byrne, P., Claxton, M.J., 1991. Pharmacokinetic and tissue distribution study of
oxytetracycline in rainbow trout following bolus intravenous administration. J. Vet.
Pharmacol. Ther. 14,
351–358.
Coliazzi, J.L., Klink, P.R., 1969. pH partition behavior of tetracyclines. J. Pharmacol. Sci. 58, 1184–1189.
Cravedi, J.-P., Chubert, G., Delous, G., 1987. Digestibility of chloramphenicol, oxolinic acid and oxytetracycline
in rainbow trout and influence of these antibiotics on lipid digestibility. Aquaculture 60, 133–141.
Curtis, L.R., Kemp, C.J., Svec, A.V., 1986. Biliary excretion of 14C-taurocholate by rainbow trout Salmo
gairdneri. is stimulated at warmer acclimation temperature. Comp. Biochem. Physiol.
C 84, 87–90.
Dauble, D.D., Curtis, L.R., 1990. Influence of digestive processes on the absorption and fate of quinoline
ingested by rainbow trout Oncorhynchus mykiss.. Environ. Toxicol. Chem. 9, 505–512.
Dyer, D.C., 1989. Pharmacokinetics of oxytetracycline in the turkey, evaluation of biliary and urinary
excretion. Am. J. Vet. Res. 50, 522–524.
Eggset, G., McQueen Leifson, R., Mikkelsen, H., Hjelmeland, K., Homme, J.M., Syvertsen, C., Wathne, E.,
B?gwald, J., 1995. Oral vaccination of Atlantic salmon, Salmo salar L., against furunculosis with vaccines
encapsulated in liposomeralginate particles. J. Mar. Biotechnol. 3, 196–199. Elema, M.O., Hoff, K.A., Kristensen, H.G., 1996. Bioavailability of oxytetracycline from medicated feed
administered to Atlantic salmon Salmo salar L.. in seawater. Aquaculture 143, 7–14.
Endo, T., Onozawa, M., Hamaguchi, M., Kusuda, R., 1987. Enhanced bioavailability of oxolinic acid by
ultra-fine size reduction in yellowtail. Nippon Suisan Gekkaishi 53, 1711–1716. Fabre, J., Milek, E., Kalfopoulos, P., Merier, G., 1971. Tetracycline kinetics in man. Digestive absorption and
serum concentration. Schweiz. Med. Wochenschr. 101, 593–598.
Ferguson, H.W., 1989. Systemic Pathology of Fish. Iowa State University Press, IA, 263 pp.
Ghandour, M.A., Azab, H.A., Hassan, A., Ali, A.M., 1992. Potentiometric studies on the complexes of
tetracycline TC. and oxytetracycline OTC. with some metal ions. Monatsh. Chem. 123, 51–58.
Grondel, J.L., Nouws, J.F.M., De Jong, M., Schutte, A.R., Driessens, F., 1987. Pharmacokinetics and tissue
distribution of oxytetracycline in carp, Cyprinus carpio L., following different routes of administration. J.
Fish Dis. 10, 153–163.
Grondel, J.L., Nouws, J.F.M., Schutte, A.R., Driessens, F., 1989. Comparative pharmacokinetics of oxytetracycline
in rainbow trout, Salmo gairdneri and African catfish, Clarias gariepinus. J. Vet. Pharmacol. Ther.
12, 157–162.
Guarino, A.M., 1986. In vivo metabolism and disposition of drugs by aquatic species. Vet. Hum. Toxicol. 28
Suppl. 1., 31–37.
Haenen, O.L.M., Grondel, J.L., Nouws, J.F.M., 1985. Pharmacokinetics of oxytetracycline, trimethoprim,
sulphatroxazole and sulphamidine in the carp. In: Van Miert, A.S.J.P.A.M., Bogaert, M.G., Debackere, M.
Eds.., Comparative Veterinary Pharmacology, Toxicology and Therapy. Proceedings of the Third EAVPT
Congress, 19–25 August 1985, Ghent, Belgium. MTP Press, Lancaster, p. 112. 190 T. Haug, P.A. HalsrAquaculture 186 (2000) 175–191
Hofmann, E.L., Butler, D.G., 1979. The effect of increased metabolic rate on renal function in the rainbow
trout, Salmo gairdneri. J. Exp. Biol. 82, 11–23.
Houston, A.H., 1971. A simple improvement in the vascular catheterization procedure for salmonid and other
teleost fishes. J. Fish. Res. Board Can. 28, 781–783.
Hunn, J.B., 1982. Urine flow rate in freshwater salmonids, a review. Prog. Fish Cult. 44, 119–124.
Hustvedt, S.O., Storebakken, T., Salte, R., 1991. Does oral administration of oxolinic acid or oxytetracycline
affect feed intake of rainbow trout?. Aquaculture 92, 109–113.
Ingebrigtsen, K., Nafstad, I., Maritim, A., 1985. The distribution of 3H-tetracycline after a single, oral dose in
the rainbow trout Salmo gairdneri. as observed by whole body autoradiography. Acta Vet. Scand. 26,
428–430.
Kleinow, K.M., 1991. Experimental techniques for pharmacokinetic data collection in free-swimming fish. In:
Mayes, M.A., Barron, M.G. Eds.., Aquatic Toxicology And Risk Assessment Vol. 14 American Society
for Testing and Materials, Philadelphia, PA, USA, pp. 131–138.
Martinsen, B., Horsberg, T.E., Sohlberg, S., Burke, M., 1993. Single dose kinetic study of sarafloxacin after
intravenous and oral administration of different formulations to Atlantic salmon Salmo salar. held in sea
water at 8.58C. Aquaculture 118, 37–47.
Mazik, P.M., Plakas, S.M., Stehly, G.R., 1994. Effects of dorsal aorta cannulation
on the stress response of
channel catfish Ictalurus punctatus.. Fish Physiol. Biochem. 12, 439–444.
Mevius, D.J., Vellenga, L., Breukink, H.J., Nouws, J.F., Vree, T.B., Driessens, F., 1986. Pharmacokinetics
and renal clearance of oxytetracycline in piglets following intravenous and oral administration. Vet. Q. 8,
274–284.
Nikinmaa, M., Soivio, A., Railo, E., 1981. Blood volume of Salmo gairdneri, influence of ambient
temperature. Comp. Biochem. Physiol. A 69, 767–769.
Nouws, J.F.M., Boon, J.H., Driessens, F., Mengelers, M.J.B., Booms, G.H.R., Van der Heijden, M.H.T., 1993.
Residue depletion of oxytetracycline in European eel. In: Haagsma, N., Ruiter, A., Czedik-Eysenberg, P.B.
Eds.., Euroresidue II: Conference of Residues of Veterinary Drugs in Food, 3–5 May 1993, Veldhoven,
the Netherlands. pp. 514–517.
Nouws, J.F.M., Grondel, J.L., Boon, J.H., Van Ginneken, V.J.T., 1992. Pharmacokinetics of antimicrobials in
some freshwater species. In: Michel, C., Alderman, D.J. Eds.., Chemotherapy in Aquaculture: From
Theory to Reality. Symposium, 12–15 March 1991, Paris. Office International des Epizooties, pp.
437–447.
Plakas, S.M., McPhearson, R.M., Guarino, A.M., 1988. Disposition and bioavailability of 3H-tetracycline in
the channel catfish Ictalurus punctatus.. Xenobiotica 18, 83–93.
Pye-MacSwain, J., Rainnie, D., Cawthorn, E., Johnson, G., 1992. Plasma pharmacokinetics and bioavailability
of oxytetracycline in Atlantic salmon held in seawater. Bull. Aquacult. Assoc. Can. 92, 70–72.
Reja, A., Moreno, L., Serrano, J.M., Santiago, D., Soler, F., 1996. Concentration–time profiles of oxytetracy-
cline in blood, kidney and liver of tench Tinca tinca L.. after intramuscular administration. Vet. Hum.
Toxicol. 38, 344–347.
Rijkers, G.T., Teunissen, A.G., Van Oosterom, R., Van Muiswinkel, W.B., 1980. The immune system of
cyprinid fish. The immunosuppressive effect of the antibiotic oxytetracycline in carp Cyprinus carpio L...
Aquaculture 19, 177–189.
Ritschel, W.A., 1992. Handbook of Basic Pharmacokinetics. Drug Intelligence Publications, Hamilton Press,
Hamilton, 588 pp.
Rogstad, A., Ellingsen, O.F., Syvertsen, C., 1993. Pharmacokinetics and bioavailability of flumequine and
oxolinic acid after various routes of administration to Atlantic salmon in seawater. Aquaculture 110,
207–220.
Rogstad, A., Hormazabal, V., Ellingsen, O.F., Rasmussen, K.E., 1991. Pharmacokinetic study of oxytetracycline
in fish: 1. Absorption, distribution and accumulation in rainbow trout in freshwater. Aquaculture 96,
219–226.
Schifferli, D., Galeazzi, R.L., Nicolet, J., Wanner, M., 1982. Pharmacokinetics of oxytetracycline and
therapeutic implications in veal calves. J. Vet. Pharmacol. Ther. 5, 247–257. Siwicki, A.K., Anderson, D.P., Dixon, O.W., 1989. Comparisons of non-specific and specific immunomodulation
by oxolinic acid, oxytetracycline and levamisole in salmonids. Vet. Immunol. Immunopathol. 23,
195–200.
T. Haug, P.A. HalsrAquaculture 186 (2000) 175–191 191
Smith, P., Hiney, M.P., Samuelsen, O.B., 1994. Bacterial resistance to antimicrobial agents used in fish
farming, a critical evaluation of method and meaning. Annu. Rev. Fish Dis. 4, 273–313.
Sohlberg, S., Martinsen, B., Horsberg, T.E., S?li, N.E., 1996. Evaluation of the dorsal aorta cannulation
technique for pharmacokinetic studies in Atlantic salmon Salmo salar. in sea water. J. Vet. Pharmacol.
Ther. 19, 460–465.
Soivio, A., Nyholm, K., Westman, K., 1975. A technique for repeated sampling of the blood of individual
resting fish. J. Exp. Biol. 62, 207–217.
Soivio, A., Westman, K., Nyholm, K., 1972. Improved method of dorsal aorta catheterization, haematological
effects followed for three weeks in rainbow trout Salmo gairdneri.. Finn. Fish. Res. 1, 11–21.
Stephens, C.R., Murai, K., Brunings, K.J., Woodward, R.B., 1956. Acidity constants of the tetracycline
antibiotics. J. Am. Chem. Soc. 78, 4155–4158.
Stevens, E.D., 1968. The effect of exercise on the distribution of blood to various organs in rainbow trout.
Comp. Biochem. Physiol. 25, 615–625.
Toften, H., Jobling, M., 1996. Development of spinal deformities in Atlantic salmon and Arctic charr fed diets
supplemented with oxytetracycline. J. Fish Dis. 49, 668–677.
Uno, K., 1996. Pharmacokinetic study of oxytetracycline in healthy and vibriosis-infected ayu Plecoglossus
alti íelis.. Aquaculture 143, 33–42.
Uno, K., Aoki, T., Ueno, R., 1992. Pharmacokinetic study of oxytetracycline in cultured rainbow trout, amago
salmon and yellowtail. Nippon Suisan Gakkaishi 58, 1151–1156.
Wendelaar Bonga, S.E., 1997. The stress response in fish. Physiol. Rev. 77, 591–625.
Wishkovsky, A., Roberson, B.S., Hetrick, F.M., 1987. In vitro suppression of the phagocytic response of fish
macrophages by tetracyclines. J. Fish Biol. 31 Suppl. A., 61–65.
Xu, D., Rogers, W.A., 1993. Oxytetracycline residue in hybrid striped bass muscle. J. World Aquacult. Soc.
24, 466–472.
土霉素
土霉素(地霉素，氧四环素)
Terramycin (Oxytetracycline)
抗菌素的一种，对多种球菌和杆菌有抗菌作用，对立克次体和阿米巴病原虫也有抑制作用，用来治疗上呼吸道感染、胃肠道感染、斑疹伤寒、恙虫病等。
【作用与用途】
抗菌谱与四环素相似，对多数革兰阳性菌、阴性菌、立克次体、沙眼衣原体、放线菌及螺旋体等都有效，对伤寒杆菌几乎无效。用于痢疾、斑疹伤寒、沙眼、结膜炎、肺炎、中耳炎、疖疮及皮肤化脓感染等。
【剂量与用法】
口服，成人0.25g ～0.5g/次，3～4次/日。
【副作用】
同四环素一般为胃肠道反应有恶心、呕吐及腹泻等。
【不良反应】
1．消化系统：胃肠道症状如恶心、呕吐、上腹不适、腹胀、腹泻，偶有胰腺炎、食管炎和食管溃疡的报道，多发生于服药后立即卧床的患者。
2．肝毒性：通常为脂肪肝变性，妊娠期妇女、原有肾功能损害的患者易发生肝毒性，但肝毒性亦可发生于并无上述情况的患者。
3．过敏反应：多为斑丘疹和红斑，此外可见荨麻疹、血管神经性水肿、过敏性紫癜、心包炎以及系统性红斑狼疮加重，表皮剥脱性皮炎并不常见。偶有过敏性休克和哮喘发生。某些用四环素的患者日晒时有光敏现象。所以，应建议患者不要直接暴露于阳光或紫外线下，一旦皮肤有红斑则立即停药。
4．血液系统：偶可引起溶血性贫血、血小板减少、中性粒细胞减少和嗜酸粒细胞减少。
5．中枢神经系统：偶可致良性颅内压增高，可表现为头痛、呕吐、视神经乳头水肿等。
6．肾毒性：原有显著肾功能损害的患者可能发生氮质血症加重、高磷酸血症和酸中毒。
7．二重感染:长期应用本品可发生耐药金黄色葡萄球菌、革兰阴性杆菌和真菌等的消化道、呼吸道和尿路感染，严重者可致败血症。
8．本品可沉积在牙齿和骨骼中，致牙齿产生不同程度的变色黄染、牙釉质发育不良及龋齿，并可致骨骼发育不良。
9．应用本品可使人体内正常菌群减少，导致维生素B 缺乏，真菌繁殖，出现口干、咽痛、口角炎和舌炎等。
【禁忌】
有四环素类药物过敏史者禁用。
【注意事项】
1．交叉过敏反应：对一种四环素类药物呈现过敏者可对本品呈现过敏。
2．对诊断的干扰：(1)测定尿邻苯二酚胺（Hingerty 法）浓度时，由于本品对荧光的干扰，可使测定结果偏高。(2)本品可使碱性磷酸酶、血尿素氮、血清淀粉酶、血清胆红素、血清氨基转移酶（AST 、ALT ）的测定值升高。
3．长期用药应定期检查血常规以及肝、肾功能。
4．口服本品时，应饮用足量（约240ml ）水，避免食道溃疡和减少胃肠道刺激症状。
5．本品宜空腹口服，即餐前1小时或餐后2小时服用，避免食物对吸收的影响。
6．下列情况存在时须慎用或避免应用：(1)由于本品可致肝损害，因此原有肝病者不宜用此类药物。(2)由于本品可加重氮质血症，已有肾功能损害不宜应用此类药物，如确有指征应用时须慎重考虑，并调整剂量。7．治疗性病时，如怀疑同时合并梅毒螺旋体感染，用药
前须行暗视野显微镜检查及血清学检查，后者每月1次，至少4次。
【药物相互作用】
1．与制酸药如碳酸氢钠同用时，由于胃内pH 值增高，可使本品吸收减少，活性减低，故服用本品后1～3小时内不应服用制酸药。
2．含钙、镁、铁等金属离子的药物，可与本品形成不溶性络合物，使本品吸收减少。
3．与全身麻醉药甲氧氟烷同用时，可增强其肾毒性。
4．与强利尿药如呋塞米等药物同用时可加重肾功能损害。
5．与其他肝毒性药物（如抗肿瘤化疗药物）同用时可加重肝损害。
6．降血脂药考来烯胺或考来替泊可影响本品的吸收，必须间隔数小时分开服用。
7．本品可降低避孕药效果，增加经期外出血的可能。
8．本品可抑制血浆凝血酶原的活性，所以接受抗凝治疗的患者需要调整抗凝药的剂量。
【孕妇及哺乳期妇女用药】
本品可透过胎盘屏障进入胎儿体内，沉积在牙齿和骨的钙质区内，引起胎儿牙齿变色、牙釉质再生不良及抑制胎儿骨骼生长，此外该类药物在动物实验中有致畸胎作用，因此妊娠期妇女不宜使用本品。本品可自乳汁分泌，乳汁中浓度较高，对乳儿有潜在的发生严重不良反应的可能，哺乳期妇女应用时应暂停授乳。
【儿童用药】
本品可在任何骨组织中形成稳定的钙化合物，导致恒齿黄染，牙釉质发育不良和骨生长抑制，故8岁以下小儿不宜用本品。
【老年患者用药】
老年患者常伴有肾功能减退，应用本品，易引起肝毒性，故老年患者应用本品时应根据肾功能减退的程度调整剂量。
兽药相关知识：临床表明，土霉素和氟苯尼考以10：1的比例，治疗呼吸道效果最佳。
【通 用 名】土霉素
化 学 名：6-甲基-4-(二甲氨基)-3，5，6，10，12，12a-六羟基-1，11-二氧代-1，4，4a ，5，5a ，6，11，12a-八氢-2-并四苯甲酰胺
拼音名：TUMEISU
英文名：OXYTETRACYCLINE DIHYDRATE
CAS No.：6153-64-6
分子式：C22H24N2O9
分子量：460.44
【作用类别】抗感染类药物
【性 状】
本品为淡黄色片或糖衣片。
【药理毒理】
四环素类抗生素。本品为广谱抑菌剂，许多立克次体属、支原体属、衣原体属、螺旋体对本品敏感。肠球菌属对其耐药。其他如放线菌属、炭疽杆菌、单核细胞增多性李斯特菌、梭状芽孢杆菌、奴卡菌属、弧菌、布鲁菌属、弯曲杆菌、耶尔森菌等对本品亦较敏感。多年来由于土霉素和四环素类的广泛应用, 临床常见病原菌对土霉素素耐药现象严重，包括葡萄球菌等革兰阳性菌及多数革兰阴性杆菌。本品与四环素类抗生素的不同品种之间存在交叉耐药。本品作用机制为药物能特异性与细菌核糖体30S 亚基的A 位置结合，抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成。
【药代动力学】
本品口服后的生物利用度仅30%左右。单剂口服本品1小时后，2 小时到达血药峰浓度(Cmax)，为2.5mg/L。本品吸收后广泛分布于肝、肾、肺等组织和体液，易渗入胸水、腹水，不易透过血-脑脊液屏障。本品蛋白结合率约为20%。肾功能正常者血消除半衰期(t1/2?)为9.6小时。本品主要自肾小球滤过排出，给药后96小时内排出给药量的70%，其不吸收部分以原形药随粪便排泄。
【适 应 症】
1．本品作为选用药物可用于下列疾病：
(1)立克次体病，包括流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、洛矶山热、恙虫病和Q 热。
(2)支原体属感染。
(3)衣原体属感染，包括鹦鹉热、性病、淋巴肉牙肿、非特异性尿道炎、输卵管炎、宫颈炎及沙眼。
(4)回归热。
(5)布鲁菌病。
(6)霍乱。
(7)兔热病。
(8)鼠疫。
(9)软下疳。治疗布鲁菌病和鼠疫时需与氨基糖苷类联合应用。
2．由于目前常见致病菌对本品耐药现象严重，仅在病原菌对本品敏感时，方可作为选用药物。
【功效主治】 1．本品作为选用药物可用于下列疾病：(1)立克次体病，包括流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、洛矶山热、恙虫病和Q 热。(2)支原体属感染。(3)衣原体属感染，包括鹦鹉热、性病、淋巴肉牙肿、非特异性尿道炎、输卵管炎、宫颈炎及沙眼。(4)回归热。(5)布鲁菌病。(6)霍乱。(7)兔热病。
【化学成分】 本品的主要成分为土霉素，其化学名：6-甲基-4-（二甲氨基）-3,5,6,10,12,12a-六羟基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6，11,12a-八氢-2-并四苯甲酰胺。分子式：C22H24N2O9分子量：460.44
【药理作用】 四环素类抗生素。本品为广谱抑菌剂，许多立克次体属、支原体属、衣原体属、螺旋体对本品敏感。肠球菌属对其耐药。其他如放线菌属、炭疽杆菌、单核细胞增多性李斯特菌、梭状芽孢杆菌、奴卡菌属、弧菌、布鲁菌属、弯曲杆菌、耶尔森菌等对本品亦较敏感。多年来由于土霉素和四环素类的广泛应用, 临床常见病原菌对土霉素素耐药现象严重，包括葡萄球菌等革兰阳性菌及多数革兰阴性杆菌。本品与四环素类抗生素的不同品种之间存在交叉耐药。本品作用机制为药物能特异性与细菌核糖体30S 亚基的A 位置结合，抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成。
【药物相互作用】 1 与制酸药如碳酸氢钠同用时，由于胃内pH 值增高，可使本品吸收减少，活性减低，故服用本品后1～3小时内不应服用制酸药。 2 含钙、镁、铁等金属离子的药物，可与本品形成不溶性络合物，使本品口服后吸收减少。3 与全麻药甲氧氟烷合用时，可增强其肾毒性。4 与强利尿药如呋塞米等药物合用时可加重肾功能损害。5 与其他肝毒性药物（如抗肿瘤化疗药物）合用时可加重肝损害。6 降血脂药考来烯胺或考来替泊可影响本品的吸收，必须间隔数小时分开服用。7 本品可降低避孕药效果，增加经期外出血的可能。8 本品可抑制血浆凝血酶原的活性，所以接受抗凝治疗的患者需要调整抗凝药的剂量。
【不良反应】 1 消化系统：胃肠道症状如恶心、呕吐、上腹不适、腹胀、腹泻，偶有胰腺炎、食管炎和食管溃疡的报道，多发生于服药后立即卧床的患者。2 肝毒性：通常为脂肪肝变性，妊娠期妇女、原有肾功能损害的患者易发生肝毒性，但肝毒性亦可发生于并无上述情况的患者。3 过敏反应：多为斑丘疹和红斑，此外可见荨麻疹、血管神经性水肿、过敏性紫癜、心包炎以及系统性红斑狼疮加重，表皮剥脱性皮炎并不
常见。偶有过敏性休克和哮喘发生。某些用四环素的患者日晒时有光敏现象。所以，应建议患者不要直接暴露于阳光或紫外线下，一旦皮肤有红斑则立即停药。4 血液系统：偶可引起溶血性贫血、血小板减少、中性粒细胞减少和嗜酸粒细胞减少。5 中枢神经系统：偶可致良性颅内压增高，可表现为头痛、呕吐、视神经乳头水肿等。6 肾毒性：原有显著肾功能损害的患者可能发生氮质血症加重、高磷酸血症和酸中毒。7 二重感染：长期应用本品可发生耐药金黄色葡萄球菌、革兰阴性杆菌和真菌等的消化道、呼吸道和尿路感染，严重者可致败血症。8 本品可沉积在牙齿和骨骼中，致牙齿产生不同程度的变色黄染、牙釉质发育不良及龋齿，并可致骨骼发育不良。9 应用本品可使人体内正常菌群减少，导致维生素B 缺乏，真菌繁殖，出现口干、咽痛、口角炎和舌炎等。
【禁 忌 症】 有四环素类药物过敏史者禁用。
【用法和用量】
口服，成人一日1.5～2g, 分3～4次；8岁以上小儿一日30～40mg/kg,分3～4次。8岁以下小儿禁用本品。
【不良反应】
1．消化系统：胃肠道症状如恶心、呕吐、上腹不适、腹胀、腹泻，偶有胰腺炎、食管炎和食管溃疡的报道，多发生于服药后立即卧床的患者。2．肝毒性：通常为脂肪肝变性，妊娠期妇女、原有肾功能损害的患者易发生肝毒性，但肝毒性亦可发生于并无上述情况的患者。3．过敏反应：多为斑丘疹和红斑，此外可见荨麻疹、血管神经性水肿、过敏性紫癜、心包炎以及系统性红斑狼疮加重，表皮剥脱性皮炎并不常见。偶有过敏性休克和哮喘发生。某些用四环素的患者日晒时有光敏现象。所以，应建议患者不要直接暴露于阳光或紫外线下，一旦皮肤有红斑则立即停药。4．血液系统：偶可引起溶血性贫血、血小板减少、中性粒细胞减少和嗜酸粒细胞减少。5．中枢神经系统：偶可致良性颅内压增高，可表现为头痛、呕吐、视神经乳头水肿等。6．肾毒性：原有显著肾功能损害的患者可能发生氮质血症加重、高磷酸血症和酸中毒。7．二重感染：长期应用本品可发生耐药金黄色葡萄球菌、革兰阴性杆菌和真菌等的消化道、呼吸道和尿路感染，严重者可致败血症。8．本品可沉积在牙齿和骨骼中，致牙齿产生不同程度的变色黄染、牙釉质发育不良及龋齿，并可致骨骼发育不良。9．应用本品可使人体内正常菌群减少，导致维生素B 缺乏，真菌繁殖，出现口干、咽痛、口角炎和舌炎等。
【禁 忌】
有四环素类药物过敏史者禁用。
【注意事项】
1．交叉过敏反应：对一种四环素类药物呈现过敏者可对本品呈现过敏。2．对诊断的干扰：(1)测定尿邻苯二酚胺（Hingerty 法）浓度时，由于本品对荧光的干扰，可使测定结果偏高。(2)本品可使碱性磷酸酶、血尿素氮、血清淀粉酶、血清胆红素、血清氨基转移酶（AST 、AL T ）的测定值升高。3．长期用药应定期检查血常规以及肝、肾功能。4．口服本品时，应饮用足量（约240ml ）水，避免食道溃疡和减少胃肠道刺激症状。5．本品宜空腹口服，即餐前1小时或餐后2小时服用，避免食物对吸收的影响。6．下列情况存在时须慎用或避免应用：(1)由于本品可致肝损害，因此原有肝病者不宜用此类药物。(2)由于本品可加重氮质血症，已有肾功能损害不宜应用此类药物，如确有指征应用时须慎重考虑，并调整剂量。7．治疗性病时，如怀疑同时合并梅毒螺旋体感染，用药前须行暗视野显微镜检查及血清学检查，后者每月1次，至少4次。
【孕妇及哺乳期妇女用药】
本品可透过胎盘屏障进入胎儿体内，沉积在牙齿和骨的钙质区内，引起胎儿牙齿变色、牙釉质再生不良及抑制胎儿骨骼生长，此外该类药物在动物实验中有致畸胎作用，因此妊娠期妇女不宜使用本品。本品可自乳汁分泌，乳汁中浓度较高，对乳儿有潜在的发生严重不良反应的可能，哺乳期妇女应用时应暂停授乳。
【儿童用药】
本品可在任何骨组织中形成稳定的钙化合物，导致恒齿黄染，牙釉质发育不良和骨生长抑制，故8岁以下小儿不宜用本品。
【老年患者用药】
老年患者常伴有肾功能减退，应用本品，易引起肝毒性，故老年患者应用本品时应根据肾功能减退的程度
调整剂量。
【药物相互作用】
1．与制酸药如碳酸氢钠同用时，由于胃内pH 值增高，可使本品吸收减少，活性减低，故服用本品后1～3小时内不应服用制酸药。2．含钙、镁、铁等金属离子的药物，可与本品形成不溶性络合物，使本品吸收减少。3．与全身麻醉药甲氧氟烷同用时，可增强其肾毒性。4．与强利尿药如呋塞米等药物同用时可加重肾功能损害。5．与其他肝毒性药物（如抗肿瘤化疗药物）同用时可加重肝损害。6．降血脂药考来烯胺或考来替泊可影响本品的吸收，必须间隔数小时分开服用。7．本品可降低避孕药效果，增加经期外出血的可能。
(8)本品可抑制血浆凝血酶原的活性，所以接受抗凝治疗的患者需要调整抗凝药的剂量。
【药物过量】
本品无特异性拮抗药，药物过量时应给予催吐、洗胃及大量饮水及补液等对症治疗及支持治疗。
【贮 藏】
遮光，密封，在干燥处保存。
【鉴 别】
取本品细粉适量（约相当于土霉素25mg ），加热乙醇25ml ，浸渍20分钟，滤过。滤液置水浴上蒸干，残渣照土霉素项下的鉴别法（1）项试验，显相同的反应。
【检 查】
应符合片剂项下有关的各项规定。
【含量测定】
取本品10片，精密称定，研细，精密称出适量（约相当于土霉素0.25g ），如为糖衣片，取4片，全部研细，按土霉素每10mg 加盐酸液（0.1mol/L）2ml ，振摇，使土霉素溶解后，再加灭菌水稀释至每1ml 中约含1,000单位的悬浮液，摇匀，静置，精密量取悬浮液适量，照抗生素微生物检定法测定。1,000土霉素单位相当于1mg 。
http://www.lonch.com.cn/Productcontent.aspx?ID=177
土霉素
(
土霉素生产工艺实训实验报 告
姓 名 :徐 泽 波
班 级 :生 物 07-1
学 号 :200710513065
指 导 教 师 :张 欣
目录
第一章 绪论 .................................................................................................................. 3 1.1 土霉素简介 ...................................................................................................... 3 1.2 实验的目的、要求与过程 .............................................................................. 3第二章 设备型号 .......................................................................................................... 4第三章 实验过程 .......................................................................................................... 5 3.1种子培养基的制备与灭菌 ............................................................................... 5 3.2发酵培养基的制备与灭菌 ............................................................................... 5 3.3发酵 ................................................................................................................... 6 3.4测定前发酵样品预处理:............................................................................... 6 3.5土霉素发酵液的酸化提取 ............................................................................... 6 3.6树脂预处理方法:........................................................................................... 7 3.7结晶与干燥 ....................................................................................................... 7 3.8标准曲线的绘制:........................................................................................... 8 3.9.标准曲线的绘制:........................................................................................ 9第四章 讨论 .............................................................................................................. 10 4.1实验数据 ......................................................................................................... 10 4.2实验心得 ......................................................................................................... 10 参考文献 ...................................................................................................................... 11
第一章 绪论
一、土霉素的简介
土霉素是四环类抗生素, 其在结构上含有四并苯的基本母核, 随环上取代基 的不同或位置的不同而构成不同种类的四环素类抗生素。其结构和命名如图。
土霉素是由龟裂链丝菌产生的, 属于放线菌中的链霉菌属, 他们具有发育零 号的菌丝体,菌丝体分枝捂隔膜,直径约为 0.4~1.0米,长短不一,多核。菌丝 体有营养菌丝、 气生菌丝和孢子丝之分, 孢子丝分化成为分生孢子, 而龟裂链丝 菌的菌落为灰白色,后期生褶皱,成龟裂状。
土霉素是典型的次级代谢产物, 其发酵的特点之一就是分批过程分为菌体的 生长期、 产物期和菌体期三个阶段。 龟裂链丝菌的生长和土霉素的生物合成受到 许多发酵条件的影响:温度、发酵 PH 值、溶氧、接种量、泡沫等。同时还受到 一些代谢调控机制的控制,磷酸盐的的调节作用、 ATP 的调节和产生菌生长速率 的调节等。
二、实验的目的、要求与过程
通过专业实训的综合训练我们了解了一种生物产品从上游的菌种培养、发 酵工段到下游的提取纯化等工段的完整的生产过程。 实训过程中锻炼了学生的动 手与思考能力, 同时让学生对土霉素这一生产过程有了充分的认识, 为后续的课 程设计以及毕业设计打下了良好的基础,减少不必要的错误,是实验更加完善。 实训要求我们掌握土霉素生产的工艺流程,掌握分批发酵的原理,熟悉发
3
2
H R 5
H 3 4
1
酵罐的灭菌与使用方法; 观察并记录上罐发酵过程中菌体的生长变化; 掌握土霉 素提取结晶等工艺的原理及操作步骤;掌握土霉素效价的测定原理及方法。 实训按照土霉素的生产工艺流程进行,先进行培养基的配制及灭菌,然后 菌种培养并开始发酵, 最后对发酵液处理以及测定产品的效价。 由于实训时间需 要很长, 并且实验设备有限, 所以我们分组分批进行实验, 彼此合作, 相互协调。 发酵过程中需要在一定时间内进行 OD 值的测定以及观察发酵罐的工作情况,此 时我们小组每个人都很积极参与,使实训顺利完成。
第二章 设备型号
主要使用的设备有:
① 空气恒温振荡器 HZQ-C 型
② 电子天平 型号 -MP2002; цax — 200g; e— 0.1g ; d— 0.01g. ③ 分管光度计 721 单位:上海精密科学仪器有限公司
④ 发酵罐 编号:20051829 ;单位:0303 BICF-2002型
⑤空气压缩机储气罐 型号:CW120C 编号 F0407303 单位:台州市寓芳压缩 机
⑥静音式全无忧空压机 单位:鞍山佳朋压缩机有限公司
⑦ 离心机 LG10-2.4A 北京医用离心机厂
⑧树脂柱 上海亚荣生化仪器厂
⑨电热复空干燥箱 编号:20041041 型号:2K-82BB 型 单位:上海实验仪器有 限公司
⑩自动压力蒸汽灭菌机 型号:GI54DW
磁力搅拌器 型号:JB-1
第三章 实验过程
3.1、种子培养基的制备与灭菌
无菌条件下, 从冷藏的产生菌的斜面孢子中, 刮取适量孢子涂在高氏斜面上, 然后置 36.5~37℃的恒温箱培养 3天,再置 30℃的恒温室培养 1天。按母瓶培 养基成分配比,配制培养基,并加淀粉酶液化后,再加入 CaCO
3
,冷却后调 pH 值,分装,包装灭菌。接种在超净工作台上,将长好的斜面孢子用无菌接种铲挖 块约 2cm2,接种于灭过菌的摇瓶种子培养基中。
灭菌条件:在高压蒸汽灭菌锅内保持 121℃ ,0,14MPa 下, 20分钟即可。 3.2、发酵培养基的制备与灭菌
种子培养基配方表
按发酵瓶培养基成分配比, 配制培养基, 并加淀粉酶液化后, 在加入 CaCO3, 冷却后调 pH 值 7.0-7.2分装,包装灭菌。
灭菌条件:在高压蒸汽灭菌锅内保持 121℃ ,0,14MPa 下, 20分钟即可。
3.3 发酵
发酵液 2.5升装入发酵罐, 离座灭菌。 接入电源, 将已灭菌的发酵培养基通 入无菌空气, 调整好发酵罐的各类初始参数:温度为 30℃、 pH6.5、 搅拌 100r/min、 泡沫和消泡剂自动调节等。 12小时后观察是否生长杂菌,再将无水乙醇倒入接 种口的环槽内, 点燃后, 进行无菌接种操作, 接种量一般为 10%。 通气量为 1:0.5~ 1.0vvm, 全程用消泡剂消泡,发酵过程过程通氨,当接种后,发酵 pH 低于 6.5时就可以开始通氨, 通氨量的多少参考 pH 值。 要求 72小时前 pH 在 6.3~6.6,72~ 120小时 pH 在 6.2~6.4,120~144小时 pH 在 6.0~6.2。 土霉素发酵周期约为七 天,每隔 24小时测一次龟裂链霉菌的菌丝浓度,采用 721分光光度计在 620nm 下测发酵液 OD 值,在菌丝接近自溶前放罐,得到土霉素发酵液。
3.4 测定前发酵样品预处理:
发酵瓶摇匀,将少量导入小烧杯,测 pH 、用 9mol/l的盐酸溶液酸化 pH 至 1.7~2.0搅拌 10分钟。 取 5ml 酸化液至 7ml 离心管, 6000转离心 4分钟, 取上 清液,备测。
3.5 土霉素发酵液的酸化提取
酸化过程采用草酸酸化, 加入草酸的目的是释放菌丝中的单位, 同时要保证 土霉素的稳定性、 成品的质量和提炼成本。 目前, 工业提炼的 pH 控制在 1.6-2.0范围内, pH 值过高对单位的释放不利, pH 值过低会影响产品的质量,发酵中存 在着许多有机和无机的物质,加入净化剂黄血盐和硫酸锌除去铁离子和蛋白质。 取一定体积发酵液,边搅拌,边加黄血盐,硫酸锌,并加草酸酸化发酵液, 调到所需 pH=1.75值后,搅拌 30分钟。酸化后,要将酸化液进行适当稀释,一 般稀释 2-3倍,有利于过滤脱色过程。
3.6.树脂预处理方法:
将准备装柱使用的新树脂,先用热水反复清洗,阳离子交换树脂可用 70℃ -80℃的热水,开始浸洗时,每隔约 15分钟换水一次,浸洗时不要搅动,换水 4-5次后,每隔约 30分钟换水一次,总共换水 7-8次,浸洗值浸洗水不带褐色, 泡沫很少时为止。水洗后,在经酸碱处理,阳离子交换树脂按以下步骤处理:① 用 1N 盐酸浸泡树脂,盐酸用量为树脂自身体积的 3-5倍,浸泡 2-3.5小时。
②用自来水冲洗至出水 pH 为 5左右,用 3倍树脂体积 5%的 Nacl 浸泡 2小 时。
③用 1N 氢氧化钠浸泡树脂,用量约为树脂本身体积的 3-5倍,浸泡 2-3.5小时。
④用水冲洗至出水 pH 为 9左右。
⑤用 1N 盐酸浸泡树脂,盐酸用量为树脂自身体积的 3-5倍,浸泡 2-3.5小 时。
⑥用酸浸泡完后用去离子水冲洗至出水 pH 为 6以上即可投入使用。
⑦.对于阴离子交换树脂水洗后的酸碱处理次序,可采用酸 -碱 -酸的次序。 树脂处理过程中, 用碱浸泡树脂, 颜色由本身的橘黄色变为棕黑色, 再用酸 浸泡,树脂颜色又由原来棕黑色变为橘黄色。将树脂填好后用恒速泵将酸化液 0.7ml/min泵入树脂柱,进行酸化液脱色。脱色时恒速泵流速不能太大,以免造 成脱色不充分。然后将一定量脱色液放入烧杯,用碱化剂调 pH 值到土霉素等电 点附近,恒温 28-30℃用磁力搅拌器搅拌结晶,搅拌转数为 70rpm/min。
3.7.结晶与干燥:
取一定量脱色液放入 4个锥形瓶中,用氨水调 pH 值为 4.6,恒温 30℃用磁 力搅拌器搅拌,结晶,搅拌转数为 70rpm ,结晶一小时。
将结晶液离心, 取上清液测定其在 500nm 下透光率和效价, 计算出结晶收率。 湿晶体经过冲洗后 , 放入水分测定仪中进行干燥,测定干粉的质量,然后将干粉 溶解于 1000ml 酸水中,测定其效价,计算干粉的效价及离心干燥收率。
3.8.相关数据的测定:
pH 的测定
(1)测样品不宜在室温下放置时间过长,应当在取样 2分钟之内测定完, 不能直接测定的样品应收样放入冰箱, 如需测定时提前从冰箱中取出放至室温测 定。
(2)打开酸度计,调节温度补偿旋钮至室温。
(3)用 pH=6.86和 pH=4.0的缓冲液校准 pH 计。
(4)校准后,纯净水冲洗电极,将电极放入被测样中,待读数稳定后读数。
(5)测定样品后应该用纯净水冲洗电极,不用时应将电极放置在饱和氯化 钾溶液中。
发酵液效价的测定:
(1)取样品加 9mol/L的盐酸溶液,先酸化至 pH=1.5-1.7, 用酸度计测量, 放置 5分钟, 过滤至 5ml 以上, 吸取滤液稀释适宜倍数 (使稀释后效价在标准曲 线范围内) ,用移液管取 1ml 稀释液于试管中,准确加入 0.01mol/L的盐酸,使 全量为 20ml ,再加入 0.05%g/ml的三氯化铁溶液 10ml ,使全量为 20ml ,摇匀, 放置 20分钟,另取 1ml 稀释液,加入 0.01mol/L的盐酸 19ml ,使全量为 20ml , 摇匀,放置 20分钟,作为空白,在 480nm 的波长下测两种液体的吸光度。 (2)提取过程中间样效价的测定:
取中间样,稀释至适宜倍数(使稀释后效价在标准曲线范围内) ,以下操作同发 酵液效价的测定方法。
(3) 效价计算:将测定的吸光度值代入标准曲线方程, 再乘以稀释倍数即得 各步效价。
3.9.标准曲线的绘制:
标准称取土碱标品 25mg ,置于三角瓶内,加 0.1mol/L盐酸, 4mol 使之完全
溶解,再用 0.01mol/L盐酸按下列公式稀释成标准液,其中, w 为土碱标准品称 样量。
0.01mol/L盐酸加入量(ml ) =土霉素效价 *w(mg)/500— 4ml
精密量取标液 0.5ml , 1.0ml , 1.5ml , 2.0ml , 2.5ml , 3.0ml ,分别放入 50ml 三角瓶中,分别加入 0.025%Fecl3溶液至总体积 20ml ,放入 38±1℃水浴中,放 置 3min , 冷却至室温测定吸收度, 测定波长 500nm , 同时做空白试验, 不加 Fecl 3溶液其他相同,总体积 20ml 。
以吸收度为纵坐标,土霉素效价单位为横坐标,绘制曲线并计算回归方程及 相关系数。 Y 为测吸收值, x 为曲线中土霉素浓度, r 应在 0.9990— 1.001之间。 b=∑ xy-nxy/zx2-nx 2 a=y-bx
r=zxy-nxy/[(zx2-nx 2)(zy2-ny 2)]1/2
第四章 讨论
一、实验数据
最终测的效价为 0.0005。
二、实验心得
很明显我们的最终结果数据偏低, 分析原因可能是因为之前的酸化过程中草 酸的量过多导致的, 由于分光光度计的原因, OD 值测的数据偏差比较明显,应 快速侧量, 避免因沉积而造成吸收度的提高。 虽然效价很低, 但是最终做出来的 产品还是很不错的。
本次实验由于人数过多, 所以采用团队协调的方法进行实验, 这使我们了解 到团队合作的重要性, 我们各小组之间的相互配合不够好也是我们实验失败的原
因之一。
实验虽然失败了, 但是我们从中获益良多。 通过这次实训, 我们对土霉素的 工艺流程到下游的提取工段有了一个清晰的认识。掌握了高压蒸汽灭菌锅的操 作, 掌握了接种的步骤及发酵罐过程的控制, 掌握了树脂分离的方法, 并利用自 己的专业知识解决了实验中面临的各种问题,为将来的工作学习打下良好的基 础。
参考文献
?周德庆 微生物学教程 北京:高等教育出版社 2002
? http://www.cnferment.net/forum/dispbbs.asp?BoardID=19﹠ ID=315
? http://www.smxpt.cn
?李永利 土霉素酸化提取工艺研究 内蒙古石油化工 2009年第 11期 CNKI ?田彩霞, 赵建强, 土霉素结晶工艺改进研究 中国抗生素杂志 2006?:178-180 ?马永林, 王晋, 梁存珍, 杨敏。 土霉素结晶母液酸化水解过程的研究环境科学。 Vol22.No.5Sept.2001.CNKI
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