范文一:叶绿素含量测定中的误差分析
V o l. 21 N o. 2 南 京 理 工 大 学 学 报第 21 卷 第 2 期 1997 年 4 月 Journa l of Nan j in g Un iver s ity of Sc ien ce an d Techn o logy A p r. 1997
α
叶绿素含量测定中的误差分析
Ξ唐银凤
() 江苏省农业科学院农业现代化研究所, 南京 210014
摘要 该文讨论了叶绿素含量测定中玻璃器皿误差、仪器误差以及采用 公 A rno n
式计算所带来的误差, 推导了用4位有效数字表示的 公式。结果表明, 对测 A rno n
定结果影响最大的是 公式的计算误差, 采用修正的 公式可以有效地A rno n A rno n
减少叶绿素含量的测定误差。
关键词叶绿素, 测定, 误差
分类号233194Q
叶绿素含量测定是植物生理研究常做的实验之一, 测定结果可为农作物的科学施肥或其它农业措施以及植物病理的诊断等提供科学依据。叶绿素含量测定可采用目视比色法和 分光光度法, 两者相比, 后者比前者具有更高的精度, 而且能在未经分离的情况下分别测定
叶绿素 a、b 的含量。分光光度法在文献1 和文献2 中已有介绍, 其主要做法是在获得叶绿
素丙酮提取液后, 由分光光度计测定其光密度, 然后利用 公式分别计算叶绿素 a、bA rno n
的浓度 c, 相加即得总浓度, 亦可按公式 c= A × 1000 ? 3415 直接计算叶绿素总浓度。T T 652
3 4关于叶绿素含量测定中的 计算公式的求解精度, 近10 来不少人提出讨论 , A rno n a
有的认为叶绿素含量测定中所用测量仪器本身固有的误差大于 公式的计算误差, 因 A rno n
而在应用中不必考虑该公式的计算误差。至于测定叶绿素含量时实验操作过程所产生的误 差对测定结果的影响则未见文献报道。本文探讨叶绿素含量测定过程使用的玻璃器皿误差、 仪器误差以及 公式计算误差对测定结果的影响, 并给出经修正的 计算公式。 A rno n A rno n 这样减少了测定结果的误差, 使结果更准确地反映客观事实。
1 叶绿素含量测定中玻璃器皿和仪器的误差
111 玻璃器皿的误差
在测定叶绿素含量时, 本实验室使用的玻璃刻度吸管有2种, 一种为10 , 绝对误差是m l
0105 ; 另一种为1 , 绝对误差为01005 , 这2种吸管的相对误差均为015 % 。m lm lm l
112 仪器误差
01000 5 , 相对误差为01002 5 % 。 g
( ) 2721型分光光度计的误差。本测定中, 由于所取波长645 在640, 650 之间,nm nm663 在658, 668 之间, 2种波长不存在重叠, 故测试波长所产生的误差可忽略。721型 nm nm
分光光度计的重现误差不大于015 % 。如将电表读数限于018消光值以内, 则可得721型分光 光度计的绝对误差为01002 5, 相对误差为013 % 。据此可知, 叶绿素含量测定中所用玻璃器
皿和仪器的相对误差为0158 % 。
2 计算公式误差 A rn on
() 14位有效数字下的 公式。关于 公式的系数误差, 文献 3 和文献 4 已A rno n A rno n
5 作了讨论, 但在推导和计算中忽略了数值计算的一般方法。根据 2定律, 2 种 L an b e r tB ee r
组分的混合溶液; 由于最大吸收峰不同, 它们的浓度 c 与吸光度 A 之间的关系为
()1 A = K c+ K cA = K c+ K c1 aa bb2 aa bb 1 1 2 2
利用文献4 的比吸收系数, 取4位有效数字进行计算, 有2 1 2 c+ 7c= 0A 4 a 10× 01092b 10× 0110066310× 01820 2 ()2 2 1 10× 01167 5ca + 10× 014560cb = 10× 011000A 645
() 解方程 2得
- 1 - 2 ca = 10× 01127 2A 663 - 10× 01258 5A 645()3 - 2 - 1 c= - 1A + 8A b 663 645 10× 0146710× 01228
其叶绿素总浓度值 c为T - 2 - 1 c= c+ c= 10× 01804 9A + 10× 01203 0A T a b 663 645 ()4
124 m g?l 。 2当 A 663 = 01156, A 645 = 01048 时, cT =
() 2计算公式误差。一般文献中给出的叶绿素的总量 c为 A rno n T
()c= 8102A + 2012A 5 T 663 645
12 m gl。经计算,2?将上述 A = 01156, A = 01048 代入, 按常规的数值计算方法, 得 c=663 645 T
其相对误差为 0178 % , 大于叶绿素含量 测 定 过 程 中 的 玻 璃 器 皿 与 仪 器 误 差。校 正 后 的
公式的相对误差为0168 % , 与原 公式的相对误差属同一数量极, 但按数值计 A rno n A rno n
算结果, 校正后的公式计算结果绝对误差为01005 而原 公式的计算结果绝对 ?, m glA rno n
误差为0105 两者相差一个数量级。?, m gl
( ) 3叶绿素测定中的总误差。用原 公式计算, 叶绿素含量测定中的总误差 ΓG =A rno n
2 - 7 2 2 2 ) (01005+ 215 × 10+ 01003+ 01007 8= 0197 % 。用 校 正 后 的 公 式 计 A rno n
2 - 7 2 2 2 ) ( 算, 叶绿素含量测定中的总误差 ΓG ′=01005+ 215 × 10+ 01003+ 01006 8=0190 % 。比较上述两值, 测定误差中 公式的计算结果误差所占权数最大, 即原公式 A rno n
2 2() 取01007 8, 校正后的公式取01006 8。根据 4式可知, 造成其较大误差的原因是 A 和A 663 645
的精度问题, 提高 A 和 A 的计算精度, 可以大幅度降低计算中的误差。663 645
3 结论
经上述分析, 本文解决了如下几个问题:
() 1叶绿素测定过程中玻璃器皿与仪器的误差为0158 % , 校正后的 公式计算误 A rno n
差为0168 % , 原 公式则为0178 % 。公式计算误差大于叶绿素测定过程中玻璃器皿误 A rno n
差与仪器误差之和。
( ) 2 用 校 正 后 的 公 式 计 算 的 叶 绿 素 的 总 浓 度 值 为 2124 ?绝 对 误 差 为, A rno n m gl
01005 ?而 未 校 正 的 公 式 计 算 的 叶 绿 素 的 总 浓 度 值 为 212 ?绝 对 误 差 为, , m glA rno n m g l
0105 即校正后的公式计算结果具有更高精度。?, m g l
() 3文献3 给出的2种公式的计算结果是不对的, 其原因是没有考虑数值计算方法。建 () () 议采用 3式作为校正后的公式, 并用 4式计算叶绿素的总浓度值。如果A 和A A rno n 663 645
取4位有效数字, 则求得的相对误差为0108 % , 则明显小于测定中玻璃器皿误差和仪器误差
之和。
参考文献
1 山东农学院, 西北农学院1植物生理学实验指导1第2版1济南: 山东科学技术出版社, 1982 2 黄祥辉, 胡茂兴1小麦栽培生理1上海: 上海科学技术出版社, 1984
() 3 叶济孙1关于叶绿素含量测定中的 计算公式1植物生理学通讯, 1985 6: 69A rno n
() 4 段光明1叶绿素含量测定中 公式的推导1植物生理学通讯, 1992. 28 2: 221, 222 A rno n
5 关治, 陈景良1数值计算方法1北京: 清华大学出版社, 1990
Error Ana ly s is in M ea sur in g Ch lorophy ll Con ten t
T an g Y in fen
( In st itu te o f A g r icu ltu ra l M o de rn iza t io n J ian g su A cadem y o f
), 210014A g r icu ltu ra l Sc ien ceN an jin g
, . . , , A BSTRACT T h ree e r ro r s in m ea su r in g ch lo rop h y ll co n ten tieg la ssw a re e r ro rin st ru2
. m en t e r ro r an d ca lcu la t io n e r ro r b y A rno n fo rm u la w e re d iscu sed in th is p ap e rT h e A rno n
. fo rm u la w ith fo u r sign if ican t d ig it s w a s dedu cedP len ty o f ev iden ce show s th a t th e m a jo r
. e r ro r s re su lt f rom th e ca lcu la t io n e r ro r b y A rno n fo rm u laT h is e r ro r can b e redu ced b y u s2
.in g a rev ised A rno n fo rm u la
, , KEY W O RD S ch lo rop h y llde te rm in a t io n e r ro r s
r简讯r
杨震副教授获日本“外国专家研究奖”
化工学院环境工程教研室杨震副教授获得日本“外国专家研究奖”, 并受聘为日本科技厅“重点基础研
究员”, 还应邀赴日本进行合作研究, 最近载誉回国。
范文二:叶绿素含量的测定
植物生理学实验报告
实验题目:叶绿素含量的测定
姓名
班级
学号
一、 实验原理和目的
根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比 。 叶绿素(丙酮)在652nm(混合)、663nm、645nm有最大吸收峰。
叶绿素(95%乙醇)在665nm、649nm,类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰,根据在分光光度计下测定的吸光度,求得叶绿素的含量
二、 实验器具和步骤
植物材料: 女贞
实验器具: 分光光度计;电子天平; 研钵; 试管; 小漏斗;滤纸; 吸水纸; 移液管 ;量筒; 剪刀
试剂: 95%乙醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸钙粉
步骤:1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右,放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及3~5ml 95%乙醇,研成均浆,继续研磨至组织变白。静置3~5min
2. 取滤纸1张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,过滤到10ml试管中,用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。
3.用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ,摇匀
4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95%乙醇为空白,在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度
5. 计算公式:
叶绿素的含量(mg/g)= (浓度×提取液体积×稀释倍数)/样品鲜重。
Ca=13.95A665-6.88A649;
Cb=24.96A649-7.32A665
C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245
单位:mg/L
三、 实验数据和作业
2、计算叶绿素含量
计算公式:
叶绿素的含量(mg/g)= (浓度×提取液体积×稀释倍数)/样品鲜重。 Ca=13.95A665-6.88A649;
Cb=24.96A649-7.32A665
C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245
单位:mg/L
由上面的公式进行代入计算,有:
Ca=13.95*1.820-6.88*0.953=18.83236
Cb=24.96*0.953-7.32*1.820=10.46448
C类=(1000*1.948-2.05*18.83236-114.8*10.46448)/245=2.8901 则:叶绿素含量=(29.29684*10*0.001*1)/0.1=2.9297
四、 数据分析
实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差
五、 思考题
为什么提取叶绿素时干材料一定要用 80%的丙酮,而新鲜的材料可以用无水丙酮提取? 答:因为叶绿素存在于叶绿体内囊体上与其上的蛋白质组成色素蛋白复合体,要分离叶绿素和蛋白质必须有水,叶绿素的头部为极性的,有亲水性
范文三:叶绿素含量的测定
植物生理学?实验
叶绿体色素?含量的测定?
----分光光度法?
姓名
学号
系别
班级
实验日期
同组姓名
摘要:
叶绿体色素?溶液各组成?成分在可见?光谱中具有?不同的特征?吸收峰。因此,应用分光光?度计在某一?特定波长下?所测定的吸?光度。叶绿体色素?的提取常用?丙酮和乙醇?有机溶剂。叶绿体色素?95 ,乙醇提取液?中叶绿素 a 和 b 及类胡萝卜?素分别在 665nm? ,649nm? 和 470nm? 波长下具有?最大吸收峰?,据此所测得?的吸光度值?代人不同的?经验公式(见结果计算?),计算出叶绿?体色素乙醇?提取液中叶?绿素 a 和 b 的浓度及其?叶绿素总浓?度和类胡萝?卜素的总浓?度,并依据所使?用的单位植?物组织(鲜重、干重或面积?),求算出色素?的含量。 一、 实验原理与?实验目的
实验原理:
利用95%乙醇提取叶?绿体色素,叶绿素a、叶绿素b和?类胡萝卜素?最大吸收峰?的波长分别?是665n?m、649nm?和470n?m。
根据分光光?度计测定的?吸光度值,可以计算出?乙醇提取液?中叶绿体色?素含量。 实验目的:
掌握分光光?度法对叶绿?素a、叶绿素b、叶绿素总浓?度和类胡萝?卜素总浓度?测定和计算?
的方法。
二、 实验材料和?方法
植物材料:菠菜叶片 、番茄幼苗叶?片
实验用具:分光光度计?、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等 实验试剂:95%乙醇、石英砂和碳?酸钙
试验方法:分光光度法?
三、 实验步骤
1、 叶绿体色素?的提取
取新鲜菠菜?叶片(或番茄幼苗?叶片)0.5克,擦干,去中脉,剪碎放入研?钵;加入少许石?英砂和Ca?CO,再加入95?%乙醇3ml?,研磨成匀浆?,再加95%乙醇10m?l,静置10分?钟;用漏斗滤去?残3
渣,用丙酮反复?冲洗研钵、残渣至无色?;用容量瓶定?容至50m?l 。
2、吸光度的测?定
取光径1c?m比色杯,注入上述叶?绿素提取液?,以95%乙醇注入另?一同样的比?色杯内作为?空白对照,在波长66?5、649和4?70nm下?测定吸光度?。
3、结果计算
依据下列丙?酮提取液中?色素浓度计?算公式,分别计算出?叶绿素a、b的浓度及?其叶绿素总?浓度和类胡?萝卜素的浓?度。
附录:722分光?光度计的使?用
1、选择灵敏度?旋纽至3;将波长调节?到600n?m,打开样品室?盖,打开电源开?关预热20?min。 2、打开样品室?盖,将测定旋纽?调至T(透光度),用调节旋纽?0调0;盖上样品室?盖,用调节旋纽?100调1?00。
3、将空白样品?放入样品槽?,按上述方法?调0和调1?00。
4、将测定旋纽?调至A(吸光度),用Abs旋?纽调0,测定待测样?品的光密度?。 计算公式 :
95%乙醇提取液?中色素浓度?的计算
C(叶绿素a)=13.95A66?– 6.8A649? a5
C(叶绿素b)=24.96A64?– 7.32A66? b9 5
C(叶绿素)=C+C=18.16A64?+ 6.63A66? Tab9 5
C(类胡萝卜素?)=(1000A?– 2.05C-114.8C)/248 x.c470 ab
1,色素浓度()提取液体积()稀释倍数mg.L,L,叶绿体色素?含量= 2样品鲜重(或干重、面积,或)gm
四、 实验结果与?讨论
1、菠菜叶片不?同波长下的?吸光度(0.42g)
波长(nm) 吸光度 平均值
665 0.702 0.683 0.755 0.7133
649 0.328 0.326 0.340 0.3313
470 0.823 0.827 0.861 0.8370
C(叶绿素a)=13.95*0.7133– 6.8*0.3313= 7.6977m?g/L a
C(叶绿素b)=24.96*0.3313– 7.32*0.7133=3.0479m?g/L b
C(叶绿素)=C+C=18.16*0.3313+ 6.63*0.7133= 10.7456m?g/L Tab
C(类胡萝卜素?)=(1000A?– 2.05C-114.8C)/248=1.8995m?g/L x.c470ab
C(叶绿素a)含量=7.6977m?g/L*0.05L*1/0.42g=91.64mg/g a
C(叶绿素b)含量= 3.0479m?g/L*0.05L*1/0.42g=36.28mg/g b
C(类胡萝卜素?)含量=1.8995m?g/L*0.05L*1/0.42g=22.61mg/g x.c
2、1#番茄幼苗叶?片不同波长?下的吸光度?(0.34g)
波长(nm) 吸光度 平均值
665 0.463 0.452 0.453 0.4560
649 0.203 0.264 0.275 0.2473
470 0.492 0.464 0.479 0.4783
C(叶绿素a)=13.95*0.4560– 6.8*0.2473= 4.6796m?g/L a
C(叶绿素b)=24.96*0.2473– 7.32*0.4560=2.8347m?g/L b
C(叶绿素)=C+C=18.16*0.2473+ 6.63*0.4560=7.5142m?g/L Tab
C(类胡萝卜素?)=(1000 A– 2.05C-114.8C)/248=0.5778m?g/L x.c470ab
C(叶绿素a)含量=4.6796m?g/L*0.05L*1/0.34g=68.82mg/g a
C(叶绿素b)含量=2.8347m?g/L*0.05L*1/0.34g=41.69mg/g b
C(类胡萝卜素?)含量=0.5778m?g/L*0.05L*1/0.34g=8.50mg/g x.c
3、4#番茄幼苗叶?片不同波长?下的吸光度?(0.2g)
波长(nm) 吸光度 平均值
665 0.219 0.225 0.231 0.2250
649 0.113 0.117 0.124 0.1180
470 0.253 0.259 0.268 0.2600
C(叶绿素a)=13.95*0.2250– 6.8*0.1180= 2.33636?mg/L a
C(叶绿素b)=24.96*0.1180– 7.32*0.2250=1.29828?mg/L b
C(叶绿素)=C+C=18.16*0.1180+ 6.63*0.2250=3.6353m?g/L Tab
C(类胡萝卜素?)=(1000* A– 2.05C-114.8C)/248=0.4300m?g/L x.c470ab
C(叶绿素a)含量=2.33636?mg/L*0.05L*1/0.2g=58.409mg?/g a
C(叶绿素b)含量= 1.29828?mg/L*0.05L*1/0.2g=32.457mg?/g b
C(类胡萝卜素?)含量=0.43mg/L*0.05L*1/0.2g=10.75mg/g x.c
讨论:
叶绿素a、b在蓝色区?也有吸收峰?,能否用这一?吸收峰波长?进行叶绿素?的定量分析?,为什么,
答:不能。定量分析的?吸收峰必须?要稳定,还要有强的?吸收,所以要选取?最高峰,因为在这个?波段吸收最?明显;另外,光合色素除?了叶绿素外?还有类胡萝?卜素,类胡萝卜素?主要吸收蓝?光,会对实验产?生干扰。
参考文献:
王英典,刘 宁. 植物生物学?实验指导 . 北京:高等教育出?版社.(第2版)
范文四:叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定
一、原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比,即A=αCL
式中:α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm时,α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A,并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 已知叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm处。已知在波长663nm下叶绿素a、叶绿素b在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27;在波长645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据加和性原则列出以下关系式:
A663=82.04Ca+9.27Cb (1) A645=16.76Ca+45.60Cb (2)
式(1) (2)A663nm和A645nm为叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度,Ca Cb分别为叶绿素a、叶绿素b的浓度,以mg/L为单位。 解方程(1) (2)组得
Ca=12.72 A663—2.59 A645 (3) Cb=22.88 A645—4.67 A663 (4) 将Ca+Cb相加即得叶绿素总量CT
CT = Ca十Cb=20.29A645—8.05 A663 (5)
从公式(3)、(4)、(5)可以看出,,就可计算出提取液中的叶绿素a、b浓度另外,由于叶绿素a 叶绿素b在652nm的吸收峰相交,两者有相同的吸光系数(均为30.5),也可以在此波长下测定一次吸光度(A652)而求出叶绿素a、叶绿素 b 总量
所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算: CT =
A652?100034.5
(6)
有叶绿素存在的条件下,用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。Licht-enthaler等对Arnon进行了修正,提出了 80%丙酮提取液中3种色素含量的计算公式:
Ca=12.21A663—2.59 A646 (7)
Cb=20.13 A646—5.03A663 (8) Cx.c =
1000A470?3.27Ca?104Cb
229
(9)
式中:Ca Cb分别为叶绿素a、叶绿素b的浓度; Cx.c为类胡萝卜素的总浓度;A663 A646 A470 分别为叶绿素提取液在波长663nm 646nm 470nm下的吸光度。
由于叶绿素在不同溶剂中的吸收光谱有差异,因此,在使用其他溶剂提取色素时,计算公式也有所不同。绿素a 、叶绿素b在95%乙醇中最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm,类胡萝卜素为470nm,可据此列出以下关系式;
Ca=13.95A665—6.8A649 (10)
Cb=24.96 A649—7.32A665 (11) Cx.c =
二、材料、仪器设备及试剂
(一)材料
新鲜(或烘干)的植物叶片。 (二)仪器设备 1. 分光光度计;2. 电子顶载天平(感量0.01g);3. 研钵;4. 棕色容量瓶;5. 小漏斗;6. 定量滤纸;7. 吸水纸;8. 擦境纸;9. 滴管。 (三)试剂
1.96%乙醇(或80%丙酮)。 2.石英砂。 3.碳酸钙粉。
三、实验步骤
1. 取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料,擦净组织表面污物,剪碎(去掉中脉),混匀。
2. 称取剪碎的新鲜样品0.2g,共3份,分别放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及2~3ml95%乙醇,研成均浆,再加乙醇10ml,继续研磨至组织变白。静置3~5min。 3. 取滤纸1张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,过滤到25ml棕色容量瓶中,用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。 4. 用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml,摇匀。
5. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95%乙醇为空白,在波长665nm、649nm下测定吸光度。
四、实验结果计算与分析
1000A470?2.05Ca?114.8Cb
248
(12)
按公式 (10) 、 (11) 、 (12) (如用80%丙酮,按公式7、8、9)分别计算绿素a 、叶绿素b和类胡萝卜素的浓度(mg/L)。(10) 、 (11)式相加即得叶绿素总浓度。
求得色素的浓度后再按下式计算组织中个色素的含量(mg/L鲜质量或干质量表示): 叶绿素含量(mg/g)=
C?V?NW?1000
式中:C为色素含量(mg/L);V为提取液体积 (mL);N为稀释倍数;W为样品鲜质量或干质量(g);1000即1L=1000ml。
注意事项
(1) 为了避免叶绿素光解,操作时应在弱光下进行,淹没时间应尽量短些。
(2) 叶绿体色素提取液不能 浑浊。可在710nm或750nm下测量吸光度,其值应小于当波长为叶绿素a吸收峰时吸光之哦的5%,否则应重新过滤。
(3)用分光光度计法测定叶绿素含量,对分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm,则叶绿素a的测定误差为2%,叶绿素b为19%,使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外,还应以纯的叶绿素a和叶绿素来校正(表2-12-1)
表2-12-1叶绿素含量测定记载表
范文五:叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定:
1实验仪器:高级型分光光度计,离心机,电子天平,剪刀,研钵,漏斗,移液管。 2实验试剂:丙酮,石英砂。
3实验材料:植物叶片。
4实验步骤:
(1) 色素的提取:取新鲜叶片,剪去粗大的叶脉并剪成碎块,秤取0.5g放入研钵中加纯
丙酮5ml ,少许石英砂,研磨成匀浆,,再加入80%丙酮5ml ,将匀浆转入离心管,并用适量80%丙酮洗涤研钵,一并转入离心管,离心后弃沉淀,上清液用80%丙酮定容至20ml。
(2) 测定OD值:取上述色素提取液1ml,加80%丙酮4ml稀释后转入比色杯中,以80%
丙酮为对照,分别测定663nm、645nm的OD值。
(3) 计算:按照公式计算叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度,再根据稀释倍数分别
计算每克鲜重叶片中色素的含量。
(4) 公式:?a=12.7A663—2.69A645 ;
?b=22.9A645—4.68A663 ;
?(a+b)=?a+?b =8.02A663 +20.21A645
注意:?代表叶绿素浓度,单位:mg/L 。
1. 由于植物叶子中含有水分,故先用丙酮进行提取,以使色素提取液中丙酮的最终
浓度近似80% 。
2. 由于叶绿素a、b的吸收峰很陡,仪器波长稍有变差,就会是结果产生很大的误
差,因此最好能用波长较正确的高级型分光光度剂。
转载请注明出处范文大全网 » 叶绿素含量测定中的误差分析