范文一:(DOC)三七茎叶黄酮类成分的研究
三七茎叶黄酮类成分的研究
三七茎叶黄酮类成分的研究
郑莹,李绪文,桂明玉,金永日(吉林大学化学学院,长春130021)
摘要:目的对三七[Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen]茎叶的黄酮类成分进行分离鉴定.方法利用水煎煮提取,大孔吸
附树脂吸附,硅胶柱色谱,ODS柱色谱等方法分离提纯,通过理化性质及IR,L?,Ms,H-NMR,”C-NMR等光谱数据鉴定其结构.
结果分离得到6个黄酮类单体化合物,分别鉴定为:山柰酚(kaempteml,I),槲皮素(quereelin,11),山柰酚-7-()_口一-鼠李糖苷
(kaempfeml7一O-口一L.rhamnoside,?),山柰酚一3一O-p-D一半乳糖苷(kaempfeml3一O-g-D—galaetoside,),山柰酚一3一O-~-D-半乳糖(2—
1)葡萄糖苷[kaempferol3—0-(2”-fl-D.glucopyranosy1)一p-D-galactopyranoside,V],槲皮素一3一O-~-D一半乳糖(2—1)葡萄糖苷[quercetin
3-O2”-#-O—glucopyranosy1)一#-O-galaetopyranoside,VI].结论除山柰酚(kaempfeml,1),槲皮素(quercetin,II)之外,其余4个化
合物皆为首次从该植物中分离得到,Ul与?为首次从该属植物中分离得到.
关键词:三七茎叶;黄酮;化学成分
中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编
号:1001—2494(2006)03—0176—03
StudiesonFlavonoidsfromStemsandLeavesofPanaxnotoginseng
ZHENGYing,LIXu—wen,GUIMing—yu,JINYong-ri(fChemistry,JilinUniversity,Changchun130021,China)
ABrRACT:OBJEC3IVEToseparateandidentifytheflavonoidsfromthestemsand1eavesofPanaxnotoginseng(Burk.)F.H.
Chen.METHODSItwasdec~tedwithwater,thenabsor~dbymaeropomusadsorptionresin,isolatedbysilicagelcolumnchromatography
andODScolumnchromatography.RESULTSSixcompoundswereelucidatedaskaempfeml(I),quercetin(11),kaempfeml7-O-a-L-rham-
noside(?),kaempferol3一pD—galactoside(),kaempfeml3一O一(2”
一pD—glueopyranosy1)一g-D—galaetopyranoside(V)andquereetin3-O-
(2”-pD—glucopyranosy1)一
5-D—galaetopyranoside(VI)CONCLUSIONcompound
?,IV,VandVIareisolatedandidentifiedforthefirst
timefromPanaxnotoginseng.
KEYWORDS:sternsandleavesofPanaxnotoginseng;tlavonoids;chemicalconstituents
三七[Panaxnotog/nseng(Burk.)F.H.ChenJ为五
加科人参属多年生草本植物,是一种用途广泛的中
药材,主要分布于云南省的文山州和广西壮族自治
区的右江流域.三七的主要化学成分为人参皂苷和
三七皂苷.有文献报道三七中含有少量山柰酚,槲
皮素和槲皮素…3O槐糖等黄酮类化合物,三七黄酮
能明显增加心肌冠脉流量,而且三七黄酮与皂苷合
用生理活性最强….考虑到对三七茎叶的开发利
用,我们对三七茎叶中的黄酮类成分进行了深入研
究,从中分离得到了6个黄酮类化合物.
1仪器与试剂
三七茎叶采自云南省文山州,经吉林大学药学
院生药学教研室王广树教授鉴定为三七[riO—
togimeng(Burk.)F.H.Chen]的茎叶.
Q—STAR质谱仪(美国应用生物系统公一J);
BRUKERAV600型核磁共振仪(600Hz);AVATAR
330型红外光谱仪;UnicoUV一2102PCS型紫外可见
全波长扫描仪;Koffiler显微熔点测定仪(未校正);
StartoriusYDO—OIR电子天平;Silica60高效薄层
色谱板(MerckJapanLimited);ODS—RP18高效
薄层色谱板(MerckJapanLimited);柱色谱硅胶(青岛
海洋化工厂,200,300目);ODS—RP18(~京金欧亚
科技发展公司,40,60gil1);AB一8大孔吸附树脂
(南开大学化工厂).所用试剂皆为分析纯,核磁共
振测试均使用TMS和DMSO.d6.
2提取与分离
取干燥的三七茎叶2k,粉碎后过40目筛,分
别加水30,24,20L煎煮提取3次,提取时间分别为
2,1.5,1}1’过滤,合并3次滤液.滤液通过大孔吸附
树脂柱吸附,以体积分数为95%的乙醇解吸得到粗
提物306g.粗提物用硅胶进行柱色谱,氯仿一甲醇
(15:1,6:1)梯度洗脱分离得到_【(195mg),11(22
n1g),?(35n1g),V(2.8g),VI(3.1g);化合物lV粗
品用ODS进行柱色谱,甲醇.水(1:1)洗脱分离得到
作者简介:郑莹,女.硕士研究生通讯作者:会永日,男,教授Tel:(0431)5628012Fax:(0431)5628012Email:jinyr@jlu.edu.Ell
?
176?ChinPharmJ,2006February.Vo1.41,vo.3中国药学杂志2O06年2月第41卷第3期
Iv(68n唱).
3鉴定
化合物工:黄色粉末,mp274,277?(CH3OH).
HC1-Mg反应阳性,FeC13反应阳性.UV(nm):
366,323,266(MeOH).Ill(KBr)em:3357,1661,
1615,l509,提示可能为黄酮类化合物.Molish反
应阴性,显示分子中不含糖.?C.NMR,6:146l8(C.
2),135.6(C一3),175.9(C.4),160.7(C5),98.2(C.6),
163.9(C-7),93.4(C.8),156.2(C.9),103.0(C.10),
121.7(C一1),129.5(C.2),115.4(C.3),159.2(C.
4),115.4(C.5),129.5(C.6).经与文献[]数据对
照,鉴定此化合物为山柰酚.
化合物?:黄色粉末,mp>300?(CH0H).
HC1-Mg反应阳性,FeC13反应阳性.UV一(nm):
369,256(MeOH).IR(KBr)(2m:3399,1659,l613,
1512,提示可能为黄酮类化合物.Molish反应阴性,
显示分子中不含糖.?C.NMR,6:146.8(C.2),135.7
(C一3),175.8(C-4),160.7(C.5),98.1(C.6),163.8(C.
),93.3(C.8),156.1(C一9),103.0(C10),121.9(C
1),l15.0(C一2),145.0(C.3),147.6(C.4),115.6
(c.5),I19.9(c.6).经与文献l0J数据对照,鉴定此
化合物为槲皮素.
化合物?:黄色粉末,mp227,230cIC(CH3OH).
HC1-Mg反应阳性,FeCI3反应阳性.uV(nm):
367,326,266(MeOH).IR(KBr)cm,:3381,1655.
1587,1495,提示可能为黄酮类化合物.Molish反
应阳性,显示分子中含糖.C—NMtt,6:146.8(C一2),
136.0(C一3),176.0(C.4),160.3(C一5),98.8(C一6),
161.4(C一7),94.3(C.8),155.7(C一9),104.6(C.10),
121.5(C一1),129.6(C一2),115.4(C.3),159.3(C.
4),115.4(C一5),129.6(C一6),98.4(C.1),70.2(C一
2”),70.2(C一3”),71.6(C一4),69.8(C.5”),17.9
(C一6).H-NMR,6:l2.47,l0.12,9.52(各1H,s,
一
OH),6.40(1H,d,J=1.8Hz,6.H),6.80(1H,d,
J=1.8}Iz,8一H),6.92(2H,d,J:9.0Hz,3,5.H),
8.08(2H,d,J=9.0Hz,2,6-H),5.54(1H,s,l.H),
1.22(3H,d,J=5.4Hz,6一H),3.45(1H,q,J=6.0
ttz,3”-H),3.32(IH,d,t,=6.0Hz,4,,H),3.85(IH,
d,J=6.0Hz,5”-H),3.64(1H,d,J=6.0Hz,2.
H).经与文献lJ数据对照,鉴定此化合物为山柰酚.
7—0廿L.鼠李糖苷.
化合物IV:黄色粉末,mp231—233?(CH3OH).
HC1-Mg反应阳性,FeC13反应阳性.uV一(nm):
353,266(MeOH).Ill(KBr)cm....:3423,l657,1608,
中国药学杂志2oo6年2月第4l卷第3期
1505,提示可能为黄酮类化合物.Molish反应阳性,
显示分子中含糖.c.NMR,6:156.3(C2),133.2(C一
3),177.5(C-4),161.2(C.5),98.7(C6),164.0(C.7),
93.6(C一8),156.4(C.9),103.8(C.10),120.8(C.1),
130.9(C-2),115.0(C.3),159.9(C.4),l15.0(C.
5),130.9(C.6),101.6(C.1),71.2(C.2”),73.1(C.
3”),67.8(C.4”),75.8(C.5),60.1(C.6”).HNMR,
6:12.61,10.75,10.16(各IH,s,.OH),6.20(1H,d,
J=1.2Hz,6一H),6.40(1H,d,l,=1.2Hz,8.H),6.86
(2H,d,J=8.4Hz,3,5H),8.08(2H,d,J=8.4
}Iz,2,6.H),5.40(1H,brs,J=7.2Hz,1”.H).经与
文献lJ数据对照,鉴定此化合物为山柰酚.3.0.p-D.
半乳糖苷.
化合物V:黄色粉末,HC1.Mg反应阳性,Fecl
反应阳性.uV(nm):350,267(MeOH).lR(KBr)
em一:3408,1655,1609,1508,提示可能为黄酮类
化合物.Molish反应阳性,显示分子中含糖.?c
NMtt,6:155.5(C.2),132.8(C.3),177.5(C.4),161.2
(C.5),98.6(C.6),164.0(C.7),93.6(C.8),156.2
(C-9),103.9(C-10),120.9(C,1),131.0(C一2),
115.0(C一3),159.9(C.4),l15.0(C.5),130.9(C一
6),98.3(C一1”),80.4(C.2),73.3(C.3”),67.6(C.
4”),75.8(C.5”),59.9(C.6”),104.2(C.1,,,),74.4
(c.2),76.9(C.3),69.7(C.4,),76.6(C.5),60.8
(C6).H.NMR,6:12.68,10.82,10.15(各1H,s,.
OH),6.20(1H,d,J=1.8Hz,6一H),6.40(1H,d,
J=1-8}Iz,8-H),6.89(2H,d,J=7.2Hz,3,5一H),
8.08(2H,d,J=7.2Hz,2,6一H),5.68(1H,brs,
J=7.2Itz,l一H),4.58(1H,brs,J=7.2Itz,1.H).
经与文献l_6j数据对照,鉴定此化合物为山柰酚一3一O—
p-D半乳糖(2一1)葡萄糖苷.
化合物?:黄色粉末,HC1.Mg反应阳性,FeC1
反应阳性.U,一(nm):358,257(MeOH).Ill(KBr)
em:3394,1656,1608,1508,提示可能为黄酮类
化合物.Molish反应阳性,显示分子中含糖.?c—
NMtl,6:155.4(C.2),133.0(C一3),177.4(C.4),161.2
(C.5),98.6(C一6),164.0(C7),93.4(C-8),l56.2(C一
9),l03.8(C10),121.1(C一1),115.3(C.2),l44.8(C.
3),l48.5(C一4),ll5.9(C.5),l22.1(C一6),98.4(C—
l),80.8(C.2),73.3(C.3),67.5(C.4),75.8(C
5),59.9(C.6”),lo4.3(C—l),74.4(C.2),76.7(C一
3),69.6(C.),76.6(C一5),6O.7(C.6,).H.NMR,
6:12.70,l0.8l,9.69,9.10(各lH,s,一0H),6.20
(1H,d,t,=1.2}Iz,6一H),6.40(1H,d,,=1.2}Iz,
P _,.2m,.4,M.3’l77’
苍术遗传结构的RAPD分析
郭兰萍.黄璐琦,蒋有绪,詹亚华.(1.中国中医科学院中曲研究所生药室,北京100700;2.中国林业科学研究院,北京100091;3
湖北中医学院,武汉430061)
摘要:目的考察苍术遗传特性,探讨不同产地苍术遗传多样性.方法用RAPD方法,选择2o个随机引物对47株苍术叶片
DNA进行扩增.在种内多态性水平,个体间遗传关系及居群间遗传分化3个方面对苍术的遗传结构进行分析.结果?RAPD
共检测到94条谱带,其中77个位点为多态位点.苍术种内多态性百分率为81.9l%,Shannons信息指数0.4132,Neis基因多
样性指数为0.2743;?来源于两个亚居群的11个苍术道地药材聚为一类,而其他居群或亚居群的非道地苍术个体均没有各
自聚为一类;?苍术居群内,亚居群间和居群间变异分别占总变异的76.74%,11.58%和11.68%结论本研究所用3个指
标均表明苍术种内遗传多样性水平较高;苍术的遗传变异主要分布在居群内,但居群间已形成一定的遗传分化;茅山苍术个
体间的遗传距离较小,遗传背景较为相似,并且不论在居群水平还是个体水平,茅山苍术都能单独聚为一类,表明茅山苍术在
长期适应环境的过程中,已经发生遗传上的分化.
关键词:苍术;遗传分化;道地药材;RAPD
中图分类号:R282.5文献标识码:A文章编号:1001—2494(2006)03—0178—04
RAPDAnalysisonGeneticStructureofAtractylodeslancea
GUOLan.ping’,
HUANGLu.qi,JIANGYou—xu2,ZHANYa.hua3(1.InstitItieofChineseM
ateriaMedica,AcademyofTraditio,.
alChineseMedicine,&100700,China;2.Researchlnsthuteof~brestry,ChineseAcademyofForestry,雎100091,China;3.Hubei
CollegeTraditionalChineseMedicine,lVuhan430o65,Ch/na)
BsTRACI’:0联lEC?
VETostudythegeneticstructureof”Atractylodeslanceamaddiscussitseffectonthegeneticpolymorphismofgeo—
herbs,Mao-cangzhu.METHODS47individualsfrom3populations,whichweredividedinto5nongex~herbsub-populationsand2geoherbs
sub-populations,ofA.1anceawereanalyzedbyRAPDwith20randomprimers.ThegeneticstructureofA.1anceawasstudyaccordingtothe
polymorphism,hereandgeneticmutation.RESULTS?
77bandswerepolymorphicamongthetotalof94,ppswas81.91%,1wfl,sO.4132
andhewas0.2743inA.1ancea.?
A1lofl1individualsofgoherbs,whichincludedsub-population6and7,clusteredtogether.?Nested
analysisshowedvariationswithinpopulations,betweensub-populationsandbetweenpopulationsofA.1anceawere76.74%,l1.58%and
11.68%.respectively.CONCLUSIONTherearehighgeneticdiversityinA.2n,m.Thenthemajorofthegeneticvariationaredistributed
inpopulations,allthoughthereareobviouslygeneticvariationbetweenpopul
ations.Finally,geneticdistancesamongtheindividualsofMao-
cangzhu,whichathegeoherbsofA.1ancea,weresmal1.Mao-cangzhuOallclustertogetherbothinindividualandpopulationleve1.Genetic
factorsplayanimportantroleinformingMao-cangzhugeoherbsandtherearegeneticvariationsbetweenMao-cangzhuandtheothersofA.
1anceaduringthelongtermadaptationtotheenvironment.
8一H),6.80(1H,d,J=8.4Hz,5-H),7.70(1H,dd,
J=8.4,1.8Hz,6-H),7.5O(1H,d,J=1.8Hz,2.
H),5.66(1H,brs,J=7.8Hz,l”一H),4.57(1H,brs,
.,=7.8Hz,1-H).经与文献【J数据对照,鉴定此化
合物为槲皮素.3.D-JD.半乳糖(2—1)葡萄糖苷.
RE]F1咂cEs
[1]WEIJx,WANGJF,ZHANGLY,eta1.ChemicalstudiesofSan.qi
Panaxnotoginseng(Surk.)F.H.Chen一1.Studiesonthecon—
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galactosideandfurtherflavonoidsfromP0llenofPetuniahybrida[J].
Phyto&errd~[标签:快照]
范文二:黄芪黄酮类成分分析
[收 稿日期 ] 20100311(004) [通 讯作者 ]
*
田圣 志 , 副 教 授 , 硕 士生 导 师 , 从 事 中 药 炮 制 与
抗艾 滋 病 中 药 新 药 的 研 究 , Tel:18637191919, 0371-65837585, E-mail:tianshzh@126. com
黄 芪 药 材 主 、 侧 根 中 黄 酮 类 成 分 含 量 比 较
田圣 志
1*
, 杨玉涛
1, 2
, 张振 凌 1, 常良
1
(1. 河南中医学院 , 郑州 450008; 2. 沈丘县食品药品监督管理局 , 河南 周口 466300)
[摘要 ] 目的 :比较黄芪药材主、 侧根中黄酮类的含量。 方 法 :以毛 蕊异黄酮和 芒柄花素为 指标 , 采 用高效液相 色谱法对 黄芪药材主、 侧根中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量进行测定。 结果 :黄 芪药材侧根 中毛蕊 异黄酮 和芒柄 花素的 含量分 别比主 根平均高 28. 00%, 29. 84%。 结论 :该研究对黄芪质量评价具有积极意义 , 值得进一步研究。
[关键词 ] 黄芪 ; 主根 ; 侧根 ; 毛蕊异黄酮 ; 芒柄花素
[中图分类号 ] R284. 1 [文献标识码 ] B [文章编号 ] 1005-9903(2010) 09-0092-04
Com pario n of Co nte nts of Flavo noids in Radix As tragali Tap
Ro ot an d Late ral Root
TI AN S heng-zhi
1*
, YA N G Yu-tao
1, 2
, ZH A NG Zhen-ling 1, CH AN G L iang
1
(1. Henan university of Traditional Chines e Medicine, Zhengzhou 450008, China;
2. S henq iu Food and Drug A dministration, Zhouk ou 466300, China )
[Abst ract] Objec tive:To compa re the contents of flavonoids in ra dix astragali tap root a nd latera l root. Method:Use ca lycosin and fer mononetin as the indicators, determ ina tion of the contents of their in ra dix astragali ta p root a nd la tera l root by high perform ance liquid chroma tography(HPLC) . Res ult:The a verage contents of calyco-sin a nd fermononetin in la ter al root higher than the ta p root w ere 28. 00%, 29. 84%.Conclus ion:The research w ith positive significa nce to the astragalus qua lity eva luation, a nd w orth to be further study.
[Ke y wo rds] radix astragali; ta p root; la tera l root; calycosin; ferm ononetin 黄芪为豆科植物蒙古黄芪 A s tragalus m em brana-ceus (Fisch. ) Bge. var. mongholicus (Bge. ) Hsiao 或膜 荚黄芪 A. em branaceus (Fisch. ) Bge 的 干 燥 根。主 产于内蒙古、 山西、 甘肃、 黑龙江等地。 春、 秋二季采 挖 , 除去须根和根头 , 晒干
[1]
。以根条粗长、 皱 纹少、
质坚而绵、 粉性足、 味甜者为佳 [2]
。黄芪因品种和产
地不同有的主根长而粗 , 侧根短而细 , 有的 侧根较多 相对较长 , 故饮片大小差异较大 , 与 主侧根 所占比例 有关。商品药材以长短、 粗细分为 4个 等级 , 以长和 粗者佳。市场上多以饮片大小决定 质量优 劣及价格 高低 , 同品种黄芪 片 型越 大 , 认 为 质量 越 好 , 价 格也 越高。 2005年版 《 中 国 药典 》 以黄 芪 甲苷 做 为 定量 指标 , 并规定其含 量不 得少 于 0. 04%。作 者在 做黄
芪制剂以及质 量标 准的 实 际工 作中 , 以 黄芪 甲 苷含 量高低确定黄 芪的 质量 优 劣 , 发现 市 场 上黄 芪 饮片 的大小与黄芪 质量 优劣 的 关系 不完 全 一 致 , 即 黄芪 的化学成 分 含 量 与 黄 芪 的 饮 片 大 小 呈 不 完 全 正 相 关。有些饮片较大但黄芪甲苷含量 并不符合 药典要 求 , 而较小的饮 片确 合格。 为 综合 评 价 黄芪 饮 片质 量 , 作者对黄芪中主要化学成分 (皂苷类、 黄酮 类、 多 糖类等 ) 与其商 品等 级的 关系 以及 主 侧根 中化 学成 分含量进行了 研究 , 现仅 对通 过采 用 高 效液 相 色谱 法对黄芪药材主侧根中毛蕊异黄酮 和芒柄 花素 2个 黄酮类成分含量研究情况报告如下。 1 仪器与试药
1. 1 仪 器 Wa ters 高 效 液 相 色 谱 仪 系 统 (Waters 600E 泵 , Waters CapLC 2487双 λ吸 光 度 检 测 器 , Waters 717plus 自 动 进 样 器 , Em pow er 色 谱 工 作 站 , 在线脱气 机 , 柱 温箱 ) ; SK 3200H 超 声 波 清 洗 器 (上 海科导超声仪器有 限公 司 ) ; M ETTLER AE 240型 1/10万电子天平 , Sa rtor ius 1/万电子天平。
?
29? 第 16卷第 9期 2010年 8月 中国实验方剂学杂志
Chinese J ournal of Experim ent al Traditional Medical Form ulae Vol. 16, No. 9Aug. , 2010
1. 2 试药 甲醇 (色谱纯 , 天津四友精细化学品有限 公司 ) , 甲醇 (分析纯 , 宿州化学试剂厂 ) , 纯净水 (杭州 哇哈哈集团有限公司 ) ; 毛蕊异黄酮和芒柄花素对照品 由南京泽朗医药科技公司提供 (纯度均大于 98%) 。 1. 3 药材 黄芪药材分别购自安徽亳 州药材 行、 河 南郑州中药城 , 经河 南中 医学 院陈 随 清 教授 鉴 定为 蒙古黄芪 A. memb ranaceus 的干燥根 ; 将所 采集样品 按商家不同分别标记为亳州 A 、 亳州 B 、 郑 州。将黄 芪药材主根和侧根分开 , 除去杂质 , 洗净 , 润透 , 切厚 片 , 干燥 , 筛去碎屑 , 分 别采 用 高速 万 能 粉碎 机 粉碎 成粉末 , 过 4号筛 , 混匀 , 备用。 2 方法与结果
2. 1 色 谱 条 件 Waters S unfire
TM
C 18色 谱 柱 (4. 6
m m ×250mm, 5μm) , Wa ters S unfire TM
C 18保 护 柱
(4. 6m m ×250mm, 5μm) ; 流 动相 A 甲醇 , B 水梯 度洗脱 0m in 50%A, 20min 55%A, 30min 60%A; 温度 35℃ ; 检测 波长 254nm; 流速 1m L ? min -1
, 进 样量 10μL 。色谱图见图 1~
3。
图 1 毛蕊异 黄酮 和芒柄 花素混 合对 照品 HPLC
1. 毛 蕊异 黄酮 ; 2. 芒柄
花素
图 2 黄 芪药 材 (亳州 B) 主根
HPLC
图 3 黄 芪药 材 (亳州 B) 侧根 HPLC
2.2 对照品溶液的制备 精密称取毛蕊异黄酮 4. 56m g 、 芒柄花素 2. 54m g, 分别置 10mL 量瓶中 , 加 甲醇 定容 , 摇匀 , 分别 移取 1m L 毛 蕊异黄 酮 (4. 56×10
-1
g ? L -1
) 和芒柄花素 (2. 54×10
-1
g ? L -1
) 至 10m L 量瓶
中 , 加甲醇定容至刻度 , 摇匀 , 得质量浓度分别为毛蕊 异黄酮 4. 56×10-2
g ? L -1
和芒 柄花素 2. 54×10-2
g ? L
-1的溶 液 为 母 液。 分 别 移 取 毛 蕊 异 黄 酮 (4. 56×10
-2
g ? L -1
) 和芒柄花素 (2. 54×10-2
g ? L -1
) 母液各 2m L 于 同一 5m L 量瓶中 , 加甲 醇定容 , 摇匀 , 得 质量浓度 为 毛蕊异黄酮 18. 24×10-3
g ? L -1
和芒柄花素 10. 16×10-3
g ? L -1
的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取样品粉末 (过 4号筛 ) 2g, 置具塞锥形瓶中 , 加甲醇 30mL, 超声提取 45min, 过滤 , 残渣 加 30mL 甲醇重 复提 取 1次 , 合 并滤 液 , 蒸干 , 加甲醇溶解 , 定容至 25m L 量瓶中 , 即得 , 进样
前用 0. 22μm 微孔滤膜过滤。
2. 4 线性关系的考察 取毛蕊异黄酮和芒柄花素的 混合对照品溶液 1, 5, 10, 15, 20μL, 注入液相色谱 仪 , 测得峰面积积分值。以进样量 (μL) 为横坐标 , 峰 面积积分值为纵坐标 , 得线性方程。毛 蕊异黄酮 Y =1. 01×105
X -2. 43×104
, r =1, 线 性 范 围 0. 01824~0. 3648μg; 芒 柄 花素 Y =7. 75×104
X -3. 07×104
, r =0.9998, 线性范围 0. 01016~0. 2032μg 。 2. 5 精密度试 验 精 密吸 取 同一 黄 芪 供试 品 溶液 10μL, 重复 进样 5次 , 测 得毛 蕊异黄 酮 峰面 积 RS D
0. 75%, 芒 柄 花 素 峰面 积 RS D 0. 59%, 说明 仪 器 精 密度良好。
2. 6 稳定性试验 吸取同一黄芪供试品溶液 , 分别在 0, 2, 4, 8, 12, 24, 48h 进样 10μL, 测得毛蕊异黄酮和 芒柄花 素 色 谱 峰 峰 面 积 , 计 算 峰 面 积 RS D 分 别 为 2. 00%和 1. 45%, 说明样品溶液 48h 内稳定性良好。 2. 7 重复性试 验 取 黄 芪粉 末 , 精 密 称取 5份 , 每 份 2g, 按 2. 3项下 方 法 制备 样 品溶 液 , 按 2. 1项下 色谱条件注入液相色谱仪 , 进行测定 , 结果毛 蕊异黄 酮含量 RSD 2. 90%, 芒柄 花素 含量 RSD 1. 89%, 说 明实验方法重复性较好。
2. 8 加样回收 率 精 密称 取 已知 含 量 的黄 芪 粉末 6份 , 每 份 1g, 精 密 加 入 质 量 浓 度 为 4. 56×10
-2
g ? L -1
毛蕊异黄酮溶液母液 6mL 和质量浓度为 2. 54×10
-2
g ? L -1
芒柄花素溶液母液 5m L, 按 2. 3项下方
法制备供试品 溶液 , 按 2. 1项 下色 谱 条 件注 入 液相 色谱仪 , 进行测定 , 得 毛 蕊异 黄 酮、 芒 柄 花素 平 均回 收 率 分 别 为 100. 94%, 103. 86%, RSD 分 别 为 1. 72%, 1. 14%。
2. 9 样品含量 测定 精密 称 取购 自 不 同商 家 黄芪
?
39?
药材主根、 侧根的粉末 , 按 2. 3项方 法制备 供试品溶 液 , 按 2. 1项下色谱条件注入液 相色谱 仪 , 测得峰面 积积分值 , 代入线性方程 , 以外标法计 算样品 中毛蕊 异黄酮和芒柄花素的含量 , 见表 1。
表 1 甘 肃产黄 芪药 材主根 、 侧 根中 毛蕊异 黄酮 和芒柄 花素 含量 (n =3)
样品 来 源
毛 蕊异 黄酮 芒柄花 素
质量分 数 /mg ? g -1RSD /%差 值率 /%质量 分数 /mg ? g -1RSD /%差值 率 /%
主根 亳 州 A 0. 11201. 07
38. 21 0. 10570. 85
15. 52
侧根 亳 州 A 0. 15481. 450. 12211. 43
主根 亳 州 B 0. 26971. 39
30. 44 0. 10061. 29
62. 33
侧根 亳 州 B 0. 35181. 110. 16331. 11
主根 郑 州 0. 040811. 28
15. 36 0. 034881. 11
11. 67
侧根 郑 州 0. 047081. 450. 038951. 29
注 :1. 黄芪 药材 主、 侧根中 毛蕊 异黄酮 和芒 柄花素 含量的 平均 差 值率 分 别为 28. 00%, 29. 84%; 2. 样 品中 毛 蕊 异 黄酮 或 芒 柄 花素 的 含 量 (mg ? g -1) =(Y ×25×对照品 浓度 ) /(10×样 品的 实际称 重 ) ; 3. 差 值率 =(侧根含 量 -主根含 量 ) /主 根含 量 ×100%。
3 讨论
黄芪的化学成分众多 , 主要含有黄 酮类、 皂苷类 和多糖等 [3]; 其中 黄酮 类化 合物 主 要有 异黄 酮 和异 黄酮苷成分组成 , 二者的药理作用相同 [4], 异黄酮类 具有抗病毒、 抗菌、 降血脂、 抗氧自由基 等作用 , 为其 有效成分之一 [5]。具 有较 强的 生 理活 性 , 应 与 黄芪 味甘、 性 温 , 归 肺、 脾 经 , 具 补 气 固 表 , 利 尿 托 毒 , 排 脓 , 敛疮生肌等作用 [1]密切相关 , 至少与其中的部分 作用有关。其含量 的高 低对 其 质 量的 影 响较 大 , 制 定药材及饮片标准以及炮制制剂生 产过程 时应加以 重视。目前国内饶伟文、 宋纯清、 胡 芳弟等 分别采用 高效液相色谱法 对黄 芪中 毛蕊 异 黄酮、 芒柄 花 素等 部分大极性异黄酮进行了测定研究 [6-8], 有 关黄芪药 材主、 侧根中黄 酮类 成 分含 量 的研 究 未见 报 道。因 此本实验对黄芪饮片大小与黄芪质 量的关 系进行了 初步探讨 , 对黄芪药材的质量评价具有积极意义。 限于条件 , 本实 验 仅从 安 徽亳 州 和 河南 郑 州两 处采集样品 3批 , 经 查 询 所 采 集 样 品 均 产 自 甘 肃。 虽然采集 样 品 不 全 面 但 具 有 代 表 性。 研 究 结 果 表 明 , 黄芪药材侧 根中 毛蕊 异黄 酮和 芒 柄 花素 的 含量 比主根分别平均高 出 28. 00%和 29. 81%, 各 样品之 间存在较大差异 , 对同株黄芪主、 侧 根中两 者含量进 行检测比较 , 有的差植率更大。黄芪药 材产地 广泛 , 加之受土壤、 气候等因素的影响 , 因 而侧根 在整个药 材中所占比例不尽相同 , 有的品种侧根 少 , 但有的侧 根多可达到 30%甚 至更 多。 作 者 认为 目 前 市 场 上 黄芪饮片的大小 与其 质量 优劣 的 关系 不 完全 一 致 , 除应与黄芪药材的品种、 产地等因素有 关外 , 还与主 侧根在药材中所占比例关系密切。 因而无 论是为了 充分利用药用资 源还 是对 黄芪 的 质量 进 行评 价 , 对 侧根的利用和研究应引起足够的重视。
关于黄芪药材侧根中毛蕊异黄 酮和芒柄 花素的 含量高于主根 的原 因 , 可 能与 其植 物 生 长过 程 中与 土壤接触面积以及有效成分的富 集和代谢 有关。黄 芪产区分布在 内蒙 古、 山 西、 甘 肃、 黑 龙 江等 全 国约 十余个省区 , 受环境、 气候、 土壤、 采 收时间及 品种的 影响因素较多 , 这些因素对其成分有何 影响 , 与黄芪 中其他成分有 何关 系 , 该 成分 对黄 芪 质 量的 评 价价 值怎样 , 仍在研究。
[参考文献 ]
[1]国家药典委 员会 . 中 国药 典 [S ]. 一 部 . 北京 :化 学工 业出版社 , 2005:212.
[2]江苏新医学院 . 中药大辞典 [M]. 下 册 . 上海 :上海科 学技术出版社 , 1986:2037.
[3]段亚丽 , 谢梅冬 . 黄芪化学成分及其有效成分黄芪甲苷 含量测 定 的 研 究 现 状 [J]. 中 国 兽 药 杂 志 , 2005, 39 (3) :61.
[4]纪松岗 , 李翔 , 娄子洋 , 等 . 高效液相色谱法测定黄芪中 毛蕊异黄酮 苷 和芒 柄 花素 的含 量 [J ]. 第 二军 医 大学 学报 , 2006, 27(1) :81.
[5]候云德 , 宋代军 , 付丰勇 , 等 . 黄芪某些生物活性的研究 [J]. 中西医结合杂志 , 1984, 4:420.
[6]饶伟文 , 王宝琴 . 黄芪类中药中芒柄花素和毛蕊异黄酮 的 HPLC 测定 [J]. 中成药 , 1991, 13(9) :32.
[7]宋纯清 , 阎龙 , 王海燕 , 等 反相 高效液相色 谱法测定黄 芪和黄芪毛 状 根中 大 极性 异黄 酮 成分 的含 量 [J ]. 天 然产物研究与开发 , 1999, 11(2) :12.
[8]胡芳弟 , 封士兰 , 赵健雄 , 等 . HPLC 法测定黄芪中黄酮 类成分和黄芪甲苷的含 量 [J]. 分 析测试 技术与 仪器 , 2003, 9(3) :173.
[责任编辑 邹晓翠 ]
? 4 9?
[收 稿日期 ] 20100518(003)
[基 金项目 ] 河北 省唐山 市科 技局科 研项 目 (09130223b) [通 讯作者 ]
*
周程 艳 , 女 , 硕士 , 讲 师 , 从事 药用植 物资 源调查 、 中 药药 效和有 效成分 筛选 的研究 , E-mail:xuefa none@sohu. com
?资源与鉴定?
唐 山 地 区 腰 岱 山 野 生 药 用 植 物 资 源 调 查 研 究
周程 艳 *
, 郑婷 婷 , 时 晓艳 , 李海丽 , 张明亮
(华北煤炭医学院药学系 , 河北 唐山 063000)
[摘要 ] 目的 :为唐山地区药用植物资源的可持续利用和合理开发提供科学依据。 方法 :笔者采用了野外实地考 察、 问卷 调查、 资料查阅、 标本采集整理及鉴定、 药用植物资源蕴藏量的调查、 野 外化学成分 检验等 方法对 腰岱山 药用植 物资源 的种类 组成及药用价值进行了深入系统的研究。 结果 :据多年对腰岱山药用植物 资源的野 外调查 显示 , 腰岱山 药用植 物绝大 部分为 野生种类 , 共有药 用 植物 78科 196属 237种 (不含 变 种 , 变 型和 亚 种 ) 。 绝 大多 数 是 被 子 植 物 , 共 计 225种 , 占 总 种 数 的 94. 94%。其中蔷薇科、 菊科、 豆科、 百合科为本地的优势科属 , 占腰岱 山药用植物 总资源的 近 1/3。本文 亦对腰 岱山药 用植物 资源的药用部位和药用功效进行了统计分析 , 重点介绍了腰岱山的道地药材 , 并针对其开发和利用提 出了建议。 结论 :腰岱山 药用植物资源十分丰富 , 种类科属类型组成合理 , 生态环境保护良好 , 具有很大的开发价值。
[关键词 ] 腰岱山 ; 野生药用植物资源 ; 资源调查 ; 开发利用
[中图分类号 ] R282. 2 [文献标识码 ] B [文章编号 ] 1005-9903(2010) 09-0095-05
St udy o n Res ourc es of Medic in al Herbs in Mou nt ain
Yaodai in Tangsh an
ZHOU Cheng-yan *
, ZHENG Ting-ting, SH I Xiao-yan, LI Hai-li, ZHA NG Ming-liang
(North China Coal M edical College, Tangshan 063000, China)
[Abs tract] Objec tive :The resea rch amied to pr ovide the scientific ba sis for the susta inable utilization a nd r ea sona ble utiliza tion of m edicina l pla nts resources for tangshan area. Method:Using the methods of field investiga-tion, questionnaire survey, date collection, sa mples collection a nd indentification, investiga tion of medicina l herbs r esources reserves, chem ica l com position test, the species com position and m edica l value of medicine herbs in the M ountain Yaoda i w ere understood. Res ult:According to yea rs of field investigation, m ost of m edicina l herbs w ere w ild species, 78fam ilies 196genera and 237species (not including va riation, from and subspecies) of m edicinal herbs were found. The vast m ajority of species com position wa s the angiosper ms, total 225species, 94. 94%of the total num ber of species. Am ong it Rosa ceae, Com posita e, Legum inosa e, Lilia ceae w ere the dominant fam ilies a nd genera. 1/3of the total number of species. The medicate part a nd cura tive effect of the m edicinal herbs w er e statis-tical studied, the special local traditional Chinese m edicine w as ma inly introduced, a nd the suggestions for ra tional development and utilization of m edicinal pla nts resources w ere put forw ar d. Conclus ion:There w ere rich medicine herbs in M ounta in Yaodai, species, fa milies a nd genera w ere composed of rationa l type, ecologica l and environmen-tal protection w ere good, it ha d grea t value for developm ent.
[Ke y wo rds] mountain Yaoda i; w ild medicina l pla nt resources; recourses survey; exploitation a nd utiliz a-tion
?
59? 第 16卷第 9期 2010年 8月 中国实验方剂学杂志
Chinese J ournal of Experim ent al Traditional Medical Form ulae Vol. 16, No. 9Aug. , 2010
范文三:槐枝皮中黄酮类成分研究
槐枝皮中黄酮类成分研究 槐枝皮中黄酮类成分研究
冶法方
王春桃1唐于平2周玲2高浩学
(1.海南省药品检验所,海南海口570216;2.南京中医药大学,江苏南京210046) 摘要目的:研究槐(Sopor?japonicaL)枝皮中的化学成分.方法:采用硅胶柱反复层析,SephadexLH_20层析等技术手
段分离纯化单体.通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构结果:从槐枝皮正丁醇萃取部分共分得8个化合物,它们的结构
确定为槲皮素(quercetina),山~(kaempferoLII),染料木素(genisteinaII),染料木素7一二葡萄糖苷(genistein7,4_1di—0一p—D—
glucosideaV),槐属双苷(sophorabioside,V),樱黄素4—0一p_D一葡萄糖苷(pmnetin4—0一[3-D-glucoside,VI),槐属苷
(s叩hororiCOSide'VII),染料木苷(genistin,VIII).结论:这些化合物均为首次从槐枝皮中分离得到,为进一步的活性筛选奠定了基础.
关键词槐枝皮黄酮分离和提纯
中图分类号R282.71文献标识码A文章编号1672—397X(2008)07—0065—03 槐(SophoraaponicaL.)为豆科(Leguminosae)
植物.槐枝皮为槐的嫩枝皮,其作为药用历史悠久.
我们已对槐角,槐种子,槐树叶进行了系统的化学成
分研究,发现了大量的黄酮类成分[1-31.目前,尚未见
有关槐枝皮成分的研究报道为此.我们对采于南京
的槐枝皮进行了化学成分研究,现报告如下.
1仪器与材料
药材采自江苏省南京市江宁区.原植物由中国
药科大学乔春峰博士鉴定熔点测定用XT4双目体
视显微熔点测定仪测定(温度未经校正):红外光谱
用NiCOletImpact410型红外光谱仪测定:核磁共 振谱用BrukerACF一400型核磁共振仪(H—NMR 400MHz,,3C—NMR100MHz,DMSO一为溶剂,TMS 为内标)测定:ESI—MS测定使用HP1100型质谱仪 (LC/MSDSystem,ESIMode).SephadexLH一20为 Pharmacia公司产品进口分装.薄层层析及柱层析硅 胶均为青岛海洋化工厂生产,其余试剂为分析纯 2提取与分离
取干燥的槐枝皮5.6kg,碾碎,经工业乙醇回流 提取得总浸膏,依次用石油醚,氯仿和正丁醇萃取. 取正丁醇部分的浸膏.湿法上样于20倍量的硅胶 (200,300目)柱上,用氯仿一甲醇梯度洗脱,所得混 合物经硅胶柱反复层析.用SephadexLH一20柱纯 化.得到化合物I—IX
3结构鉴定
化合物I:黄色粉末,mp>300~C.易溶于甲醇,丙 酮.在365nm紫外光下显黄色荧光.氨熏后荧光加 强.盐酸一镁粉反应呈阳性.FeC1反应呈阳性H— NMR(400**MSO—)6:12.42(1HS5一OH)10.74 (1H,S,7一OH),9.57(1H,S,3一OH),9.34(1H,S,3一OH), 9.29(1H,S,4一OH),7.68(1H,d,J:2.0Hz,2一H),7.54 (1H,dd,J=8.6,2.0Hz,6一H),6.87(1H,d,J=8.5Hz,5一H), 6.39(1H,d,J=2.0Hz,8一H),6.16(1H,d,J=2.0Hz,6一H). 理化性质和光谱数据与文献『41报道的槲皮素相符, 与槲皮素对照品薄层层析Rr值一致,故鉴定该化合 物为槲皮素(quercetin).
化合物II:黄色粉末,mp>300~C.易溶于甲醇,丙 酮,在365nm紫外光下显黄色荧光,氨熏后荧光加强, 盐酸一镁粉反应呈阳性,FeC1反应呈阳性-H—NMR
(400MHz,DMSO一以)6:12.44(1H,S,5一OH),10.73(1H,S, 7-OH)10.08(1H,S4一OH),9.35(1H,S3一OH)8.02(2H, dJ:8.8Hz,2,6一H),6.91(2H,dJ:8.8Hz,3,5一H),6.42 (1H,dJ=2.0Hz,8一H),6.17(1H,dJ=2.0Hz,6一H).与文献
f41报道的山柰酚相符,与山柰酚对照品薄层层析Rf值
一
致,故鉴定该化合物为山柰酚(kaempfero1)
化合物III:淡黄色针晶(MeOH),mD297oC
298oC.溶于吡啶,热醇和热丙酮,不溶于水:盐酸一镁
粉反应呈阴性.浓硫酸反应呈黄色1H—NMR
(400MHz,DMSO一)6:12.96(1H,S,5—0H),10.87(1H, s,7一OH),9.58(1H,S,4一OH),8.32(1H,S,2一H),7.36(2H, d,J=6.6Hz,2,6一H),6.82(2H,d,J=6.6Hz,3,5一H),6.38 (1H,d,J:2.0Hz,8一H),6.22(1H,d,J=2.0Hz,6一H).理化
性质和光谱数据与对照品染料木素一致.故确定该
化合物的结构为染料木素(genistein)
化合物IV:白色粉末,mp220oC,221oC.盐酸,
镁粉反应呈阴性,硫酸反应呈亮黄色.Molish反应呈
阳性.化合物经酸水解产物通过HPTLC鉴定有染
料木素通过PC鉴定有葡萄糖uv一(nm):
316,300sh,260;IR一(cm):3410,2977,2944,1656, 1608158215021497,142513801368130712441187,
中医茄!塑堂固
1070,1046;ESI—MS(rrdz):657『M+2Me0H—H1一.lH—
NMR(400MHz,DMSO一)8:12.91(1H,s,5—0H),8.50 (1H,s,2一H),7.53(2H,d,J=8.5Hz,2,6一H),7.09(2H,d,J= 8.5Hz,3,5一H),6.74(1H,d,J=1.4Hz,8一H),6.5l(1H,d,J= 1.4Hz,6一H),5.08(1H,d,J=7.1Hz,l"一H),4.92(1H,d,J=
6.8Hz,l一H),3.163.73(1TI,其他糖质子):C—NMR
(100MHz,DMSO一)8:155.3(C一2),124.2(C一3),l80.6 (C-4),161.8(C一5),99.8(C一6),163.3(C一7),94.8(C一8), 157.5(C一9),106.3(C一10),122.4(C—l),l3O.3(C一2, 6),ll6.2(C一3,5),157.4(C一4),100.0(C—l),73.3 (C一2?),76.6(C一3?),69.8(C一4?),77.2(C一5?),6O.8 (C-6),lO5.o(c—l),73.4(C一2),76.8(C一3),69.9 (C_4,).77.3(C一5,).60.8(C一6).理化性质和光谱
数据与文献『51报道的染料木素7,4一二葡萄糖苷一
致.故确定该化合物为染料木素7,4一二葡萄糖苷
(genistein7,4一di一0一B—D—glucoside). 化合物V:白色粉末.mp250%,25lc【=,盐酸一镁
粉反应呈阴性,硫酸反应呈亮黄色.Molish反应呈阳
性.化合物经酸水解.产物通过HPTLC鉴定有染料
木素.通过PC鉴定有D一葡萄糖和L一鼠李糖:UV
一(nm):325,261;IR(cm):3400,2900, 1370,165o.1603,1563,1485,l176,1060,1010,880,805;
ESI—MS(m/z):577[M—HI一.H—NMR(400MHz,DMS0一 d6)8:12.91(1H,s,5一OH),1O.94(1H,s,7—0H),8.39(1H, s,2一H),7.49(2H,d,J=8.5Hz,2,6一H),7.05(2H,d,J= 8.5Hz,3,5一H),6.41(1H,brs,8一H),6.24(1H,brs,6一H), 5.13(1H,brs,l一H),5.O6(1H,d,J=5.2Hz,l一H),3.19- 3.89(1TI,othersugarprotons),1.20(3H,d,J=3.7Hz,6,_
H);"C—NMR(1OOMHz,DMS0一d6)8:154.5(C一2), 124.2(C一3),l80.0(C—4),l61.9(C一5),99.O(C一6),164.3 (C一7),93.7(C一8),157.6(C一9),104.4(C一10),121.9(C— l),l3O.2(C一2,6),l15.6(C一3,5),157.0(C-4),98.1 (C—l"),76.3(C一2),77.4(C一3),69.8(C-4),76.8 (C一5"),6O.5(C一6"),100.4(C—l"),70.4(C一2"'),70.3
(C一3"),71.8(C-叫4"),68.2(C一5),18.o(c一6).理
化性质和光谱数据与文献f51报道的槐属双苷一致,
故确定该化合物为槐属双苷(sophorabioside). 化合物VI:白色粉末,mp168c【=,169c【=,盐酸一
镁粉反应呈阴性.硫酸反应呈黄色.Molish反应呈阳
性.化合物经酸水解,产物通过HPTLC鉴定有樱黄
素.通过PC鉴定有D一葡萄糖;UV"(nm):
260;IR1,一(cm):3416,2978,2933,1657,1612,1579,
1502,1432.1380,1235,1069.1046,1018;ESI—MS(m/z): 445[M—Hr.H—NMR(400MHz,DMSO—d6)8:l2.9l (1H,s,5—0H),8.47(1H,s,2一H),7.52(2H,d,J=8.7Hz,2, 6'一H),7.1l(2H,d,J=8.7Hz,3,5'一H),6.68(1H,d,J= 2.2Hz,8一H),6.43(1H,d,J=2.2Hz,6一H),4.9l(1H,d,J= 团兰竺璺苎堂苎三塑中医药
7.3Hz,l一H),3.88(3H,s,7—0Me),3.19,3.87(1TI,other sugarprotons);"C—NMR(100MHz,DMSO—d6)8:
154.7(C一2),l24.O(C一3),l8O.2(C一4),l61.7(C一5), 98.O(C一6),165.2(C一7),92.4(C一8),157.4(C一9),105.3 (C-10),122.1(C一1),130.o(c一2,6),l16.O(C一3,5), 157.3(C一4),100.3(C—l),73.1(C一2),76.5(C一3"), 69.6(C一4),77.O(C一5),60.6(C一6),56.0(7一OMe). 理化性质与光谱数据与对照品樱黄素4,一0—13一D一葡 萄糖苷一致,故确定该化合物为樱黄素4f_0一B—D一
葡萄糖苷(prunetin4一0一B—D—glucoside). 化合物VII:白色粉末,1TIp258c【=,259c【=,盐酸一
镁粉反应呈阴性,硫酸反应呈黄色.Molish反应呈阳
性.化合物经酸水解.产物通过HPTLC鉴定有染料
木素,通过PC鉴定有D一葡萄糖;UV一枷nm):
327,261;IR一(cm一):3300,1657,1608,1565,1502,
l178,lo75,lo45,1010,880,8l8;ESI—MS(m/z):43l一
H】一.H—NMR(400MHz,DMSO—d6)8:12.90(1H,8,5一
OH),lO.89(1H,s,7—0H),8.38(1H,s,2一H),7.49(2H,d, J=8.8Hz,2,6一H),7.1O(2H,d,J=8.8Hz,3,5一H),6.40 (1H,d,J=2.2Hz,8一H),6.23(1H,d,J=2.2Hz,6一H),4.9l (1H,d,J=7.2Hz,l"一H),3.14,3.72(1TI,othersugar protons);"C—NMR(100MHz,DMSO—d6)8:154.9(C一
2),l24.8(C一3),l80.6(C一4),162.4(C一5),99.6(C-6), 164.8(C一7),94.4(C一8),158.2(C一9),lO5.O(C—lO), l22.5(C—l),l30.6(C一2,6),ll6.7(C一3,5),157.8 (C一4),100.8(C—l),73.7(C一2),77.4(C-3),70.3 (C一4),77.O(C一5),61.3(C一6).理化性质与光谱
数据与文献『51报道的槐属苷一致,故确定该化合物
为槐属苷(sophororicoside).
化合物VIII:白色粉末.1TIp250%,25lc【=,盐酸一
镁粉反应呈阴性.硫酸反应呈黄色.Molish反应呈阳
性.化合物经酸水解,产物通过HPTLC鉴定有染料
木素,通过PC鉴定有D一葡萄糖;UV一枷nm):
327,264;IR—(cm):3443,3236,1658,1620,1580, 1497,ll81,1088,lo43,988,828;ESI—MS(m/z):43l[M—
H1一.H—NMR(400MHz,DMSO—d6)8:12.87(1H,s,5一
OH),9.53(1H,s,4一OH),8.36(1H,s,2一H),7.34(2H,d,J= 8.4Hz,2,6一H),6.77(2H,d,J=8.4Hz,3,5一H),6.66(1H, brs,8一H),6.41(1H,brs,6一H),5.06(1H,d,J=7.2Hz,l一
H).3.16,3.72(1TI.othersugarprotons);"C—NMR
(100MHz,DMSO—d6)8:154.5(C一2),122.5(C一3),
l8O.4(C一4),161.6(C一5),99.5(C一6),l62.9C-7),94.5 (C-8),157.4(C一9),106.0(C-IO),120.9(C-1),130.1
(C-2,6),l14.9(C-3,5),157.2(C-4),99.8(C-1"),
73.O(C一2"),77.1(C一3),69.4(C一4),76.3(C一5"), 60.6(C一6).理化性质与光谱数据与对照品染料木 苷一致,故确定该化合物为染料木苷(genistin).
治法.方药.
布尔关联规则挖掘四君子汤类方药物配伍规律研究 张昱**慧王燕袁学刚蒋永光
(成都中医药大学,四)ll成都610075) 指导:周训伦
关键词四君子汤类方数据挖掘布尔关联规则 中图分类号R289.5文献标识码A文章编号 方剂药物配伍实质是方剂组成的药物之间相互 交错的复杂对应关系.这种药物之间,药物组团之间 的对应关系形成了一个单维结构的数据集合.数据之 间环环相扣,交错关联.信息量大数据挖掘技术正是 通过对数据的特征,关系,聚类,趋向,偏差和特殊现 象的深层多维分析,来揭示数据间复杂,特殊的关系, 发现其隐含的规律我们应用布尔关联规则.对四君 子汤类方进行了药物配伍规律方面的研究 1样本数据库的构建
四君子汤为治疗脾胃气虚的基础方.具有深厚的 临床实践基础,文献记载量大.能够收集到大量的临床 诊疗信息.故选择四君子汤类方作为分析对象.将数据 挖掘方法运用于四君子汤类方配伍规律的分析.一方 面能够发掘出四君子汤在历代临床使用中潜在的配 基金项目:四川省中医药管理局科研课题(2007XS17,
伍,加减变换规律.以验证和升华中医理论对四君子汤 类方的认识.更好的指导临床用药;另一方面.也对数 据挖掘技术运用于中医理论和临床的研究进行了方法
学的探讨.我们采用以方类方的方式,将四君子汤类方
界定为在药物组成,配伍规律上包含四君子汤或者其
基础配伍的一类方剂.具体选方标准如下:
(1)使用原方药物者:人参+白术+茯苓+炙甘草
(2)包含以下药物结构者:人参+白术:人参+茯
苓:人参+白术+茯苓
运用以上选方标准,从《中医方剂大辞典》【I_,《中
医类方辞典))I2】中收集自宋以后的四君子汤类方.共
967首,建立分析模版库
2数据挖掘方法
布尔关联规则是数据挖掘技术的方法之一.运用
4讨论
综上所述.我们从槐枝皮中分离得到2个黄酮
醇,1个异黄酮和5个异黄酮苷类成分.它们的结构
经波谱和化学方法确定为槲皮素(quercetin,I),山柰
酚(kaempferol,II),染料木素(genistein,III),染料木素
7,4一二葡萄糖苷(genistein7,4'-di一0一B—D-glucoside, IV),槐属双苷(sophorabioside,V),樱黄素4一0一B—D一 葡萄糖苷(prunetin4一0一B—D—glucoside,VI),槐属苷
(sophororicoside,VII)和染料木苷(genistin,VIII).均为
首次从槐枝皮中分离得到通过以上的研究基本弄清
了槐枝皮所含的主要化学成分黄酮类化合物.为今后
进一步研究其药物活性奠定了基础
5参考文献
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(志谢:中国科学院上海有机化学研究所协助测定
核磁共振谱,中国药科大学分析测试中心测试质谱) 第一作者:王春桃(1970一),女,主管药师,本科
学历.主要从事中药的检验与研究工作
通讯作者:唐于平.电子邮箱:yupingtang@nju tcm.edu.cn
收稿日期:2007—12—20
编辑:乔婧吴宁
中压茹!兰苎40兰囫
范文四:黄芩中黄酮类成分提取
黄芩中黄酮类成分的提取
(汉中职业技术学院 王丽 723000)
摘 要
黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根研究表明,黄芩活性成分主要为黄酮类化合物,其中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在医药和其他领域有着广泛用途,具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗过敏、调节免疫、调节心血管、解热、降压、降血糖等药理活性[2]。其传统提取方法有煎煮法、浸渍法、回流提取法等, 新提取法有酶提取法等。本文分别对黄芩中的黄酮类成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素提取进行讲述,以期为黄芩黄酮类成分未来的相关研究提供依据。 [1]
关键词:黄芩 黄酮 提取
1、黄芩苷的提取:
1.1 传统提取方法
黄芩苷的传统提取方法有煎煮法、浸渍法、回流提取法等。
1.1.1 煎煮法
采用煎煮法提取黄芩苷时,影响因素主要有浸泡温度、煎煮次数、加水量及煎煮时间等。李晓芳等[3]对黄芩苷用水提取工艺中的降解过程进行研究,结果发现在以水为溶剂提取黄芩药材中的黄芩苷时,宜在60℃以上条件下浸泡处理,或者将黄芩药材首先煮沸,可减少黄芩苷的降解,提高黄芩苷的提取率;而李建华等[4]进一步研究却发现在60℃时进行黄芩投料提取,黄芩苷的损失仍然比较大,提出宜在80℃以上条件下浸泡处理,或者将黄芩药材预先通过炮制灭活内源酶, 来减少黄芩苷的降解。对煎煮次数、加水量及煎煮时间影响黄芩苷的提取进行研究,孙益林等[5]认为用10倍量的水煎煮2次,每次 1.5h 为最佳工艺;王青[6]则认为黄芩水提取的最佳工艺为水煎煮3次,第 1次加l0倍量的沸水提取1.5h ,第2次加8倍量的水提取1h ,第3次加6倍量的水提取30min ,黄芩苷的收率可达91.06%;朱思明等[7]发现用料液比为1:15,提取3次,每次1.5h 为黄芩苷的较佳提取工艺。根据黄芩苷的理化性质, 可采用碱性离子水煎煮法提取黄芩苷。
韩鲁佳等[8]的实验表明,该方法的效率明显提高,以pH 值10的碱性离子水效果最好,提取效率和含量都较高,随着煎煮时问的缩短, 特别是缩短第二次煎煮时间,效率虽有所下降, 但黄芩苷的含量明显提高,可达95%。姚燕萍[9]研究提出采用黄芩加水煎煮提取后浓缩、不加矾、喷雾干燥的方法生产黄芩苷提取物的新工艺, 具有流程简单, 生产周期短, 显著提高提取效率的优点。应用新工艺后,黄芩提取物效率由原来的12%提高到22%,黄芩提取物中黄芩苷含量由原来的4%升至20%~24%,在大批量生产中,取得显著的经济效益。
可见,煎煮法作为传统的提取方法,虽然可以方便地进行工业化生产,但是提取率较低,溶剂用量大,耗时长。通过改进方法及优化工艺,可以提高黄芩苷的效率。
1.1.2 浸渍法
在探讨黄芩苷提取时,王洪鹏等[10]发现加酸沉淀时pH 值、加热温度、保温时间及静置时间对黄芩总苷效率的影响极大,并证明黄芩苷提取的最佳工艺条件为pH 值1.5~2.0,加热温度70℃,保温时间60min ,静置时间24h, 黄芩苷粗品的提取率为13.21%。冷浸法溶剂用量大, 耗时长,提取效率也较低。
1.1.3 回流提取法
张凤梅[11]通过正交试验证实乙醇浓度50%、热回流提取3h 、溶剂量为12倍时是黄芩苷的最佳提取工艺条件。熊淑华等[12]研究表明用10倍量的60%乙醇,回流提取3次,每次1h 提取,所得黄芩苷含量最高。而潘燕等[13]通过优化得到黄芩苷醇提的最佳工艺为黄芩粉末20目,回流提取2次,分别加8倍和6倍量60%乙醇提取2h 和0.5h ,黄芩苷提取率为9.81%,比传统的回流提取率有所提高。回流法虽然提取较完全,但是耗时较长,而且需要加热。
1.2 提取新方法
1.2.1 酶解法
张福维等应用纤维素酶提取黄芩中的黄芩苷,在纤维素酶的比活力为1500个活力单位、pH 值5.0、温度50℃条件下进行研究,结果显示不同酶解时间对黄芩苷的百分含量有很大影响,在50℃保温18h 产物纯度可以达到82.08%,其黄芩苷的提取率为8.67%,酶解时间为18h, 煎煮时间为40min ,黄芩苷的纯度就达到 81%,煎煮时间过长会有部分黄芩苷水解,也会影响产物纯度, 加酶提取黄芩苷比不加酶提取的产率提高16.3%,且缩短了煎煮时间,产物中黄芩苷的纯度有明显的提高。徐晓英等[14]提出了利用黄芩药材中共存酶特性调节性提取制备黄芩提取物的方法,结果显示,在设定的酶解条件下,可以平衡提取黄芩中的黄芩苷与黄芩素。
2、黄芩素的提取
黄芩中黄芩素的质量分数只有0.04%~0.28%,直接提取高纯度黄芩素难度较大,通常采用直接酸水解、浸渍法等方法将来源较广的黄芩苷制备成黄芩素。
2.1 直接酸水解法
赵春颖等[15]采用直接酸水解黄芩苷制备黄芩素,水用量为黄芩苷的100倍、浓硫酸量为黄芩苷的7倍,制备时间为6h ,萃取3次为最佳制备工艺,该工艺简单,制备率较高。而蒋建军等[16]采用酸沉碱溶法从黄芩中提取黄芩苷,通过水解黄芩苷制取黄芩素粗品,再经硅胶和聚酰胺柱层析纯化,得高纯黄芩素,结果表明最佳条件为黄芩苷在20%盐酸水溶液中为2% (质量分数) ,反应温度373K ,反应时间1.5h ,在此条件下,黄芩素的产率为89.86%,其纯度为99.35%。该方法简便快速、成本低廉,为高纯度黄芩素的制备提供了一条新途径。
2.2 浸渍法
王彩芳等[17]通过正交试验得出黄芩素的最佳提取工艺为采用冷浸法,水为提取溶剂,提取90min 共取4次, 还进行冷浸法用水作为溶剂、提取120min 、提取4次及提取90min 、提取5次的比较实验,结果黄芩素的提取率分别为4.90%和5.11%。
3、汉黄芩素的提取
关于汉黄芩素的提取,有索氏提取和酶解法提取。
3.1 索氏提取法
陈翠丽等[18]以汉黄芩素的提取率为指标作比较,得出从黄芩药材中提取汉黄芩素的最佳方案为用甲醇进行索氏提取,时间5h ,提取液浓缩得,再通过柱色谱分离,用石油醚-醋酸乙酯进行梯度洗脱,最终提取率达0.53%,比传统水煎提取法0.17%提高近2倍多。
3.2酶解法:
王宏志等[19]以汉黄芩素的提取率为指标,通过考察浸提倍数、加酶量、pH 、温度、时间对纤维素酶解反应提取汉黄芩素的影响,得出纤维素酶解黄芩药材的最佳工艺条件为浸提倍数20,加酶量20 U/g药材,pH4.8,温度50℃,时间8h 。与传统的水煎提取效果相比,酶法提取黄芩生药材使得汉黄芩素提高了近4倍。
4、小 结
综上所述,指标不同,不同提取方法的提取率也有所不同。根据各提取方法本身的优缺点,选择适合的方法。传统方法中煎煮法虽然可以方便地进行工业化生产,但是提取率较低,溶媒用量大,耗时长;冷浸法溶媒用量大,耗时长,提取率也较低;回流法虽然提取较完全,但是耗时较长,而且需要加热。因此,利用不断出现的新技术、新方法提取黄芩化学成分,是目前黄芩提取的最科学的方法。
参考文献
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范文五:月桂叶中黄酮类成分的分析鉴定
现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.7
月桂叶中黄酮类成分的分析鉴定
杨云舒,李荣,姜子涛,刘韬
(天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津市食品生物技术重点实验室,天津 300134)
摘要:利用液相色谱 ? 四级杆 ? 飞行时间串联质谱(LC-Q-TOF-MS ) ,结合标准品比较、保留时间对比、多级质谱碎片和相关文 献,鉴定了月桂叶黄酮的化学成分。利用液相 ? 三重四级杆串联质谱(LC-MS/MS)在多反应监控模式(MRM )下,分别测定了黄酮 化合物的含量。从我国月桂叶中分离鉴定出了 16种黄酮化合物,包括牡荆素鼠李糖苷(1658.53 μg/g±56.9) 、芦丁(19883.54±494.33 μg/g) 、牡荆素(4430.87±89.72 μg/g) 、 A-型原花青素三聚体(2281.88±78.90 μg/g) 、表儿茶素(148.10 μg/g±2.32) 、山奈酚 -3-O-芸香 糖苷(3491.02±47.98 μg/g) 、异鼠李素 -3-O-芸香糖苷(6643.78±99.04 μg/g) 、金丝桃苷(11979.66±317.79 μg/g) 、山奈酚 -7-O-葡萄糖 苷(738.55 μg/g±10.86) 、紫云英苷(508.60 μg/g±6.96) 、槲皮素 -3-O-木糖苷(2044.22 μg/g±57.65) 、异鼠李素 -3-O-葡萄糖苷(2079.94 μg/g±76.38) 、 槲皮苷 (2079.94 μg/g±61.84) 、 山奈酚 -3-O-鼠李糖苷 (6412.37±78.65 μg/g) 、 槲皮素 (1629.45 μg/g±47.65) 和山奈酚 (364.29 μg/g±2.84) 。测定了月桂叶黄酮提取物清除 DPPH 自由基的能力,结果证明,月桂叶黄酮具有良好的清除自由基能力。
关键词:月桂叶;黄酮;结构鉴定; LC-Q-TOF-MS ; LC-MS/MS;清除自由基
文章篇号:1673-9078(2016)07-270-275 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.7.041
Identification of Flavonoids in the Leaves of Laurus nobilis
YANG Yun-shu, LI Rong, JIANG Zi-tao, LIU Tao
(Tianjin Key Laboratory of Food Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of
Commerce, Tianjin 300134, China)
Abstract: Flavonoids in the leaves of Laurus nobilis were identified using liquid chromatography-quadrupole-time of flight mass spectrometry combined with comparison of the retention times and tandem mass spectrometric fragment patterns of standards or from related literature. Flavonoid contents were measured by liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry in multiple reaction monitoring mode. Sixteen flavonoids were detected in L. nobilis leaves, including vitexin-2-O -rhamnoside (1658.53 ± 56.9 μg/g), rutin (19,883.54 ± 494.33 μg/g), vitexin (4430.87 ± 89.72 μg/g), type-A procyanidin trimer (2281.88 ± 78.90 μg/g), epicatechin (148.10 ± 2.32 μg/g), kaempferol-3-O -rutinoside (3491.02 ± 47.98 μg/g), isorhamnetin-3-O -rutinoside (6643.78 ± 99.04 μg/g), hyperoside (11,979.66 ± 317.79 μg/g), kaempferol-7-glucoside (738.55 ± 10.86 μg/g), astragalin (508.60 ± 6.96 μg/g), quercetin-3-O -xylopyranoside (2044.22 ± 57.65 μg/g), isorhamnetin-3-O -glycosidase (2079.94 ± 76.38 μg/g), quercitrin (2079.94 ± 61.84 μg/g), kaempferol-3-O -rhamnoside (6412.37 ± 78.65 μg/g), quercetin (1629.45 ± 47.65 μg/g), and kaempferol (364.29 ± 2.84 μg/g). The 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical scavenging activities of the extract were determined, and the results clearly demonstrated that flavonoids from L. nobilis possessed significant radical scavenging activities.
Key words: leaves of Laurus nobilis L.; flavonoids; structure identification; liquid chromatography-quadrupole-time of flight mass spectrometry; liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry; free radical scavenging
月桂 (Laurus nobilis L.) 樟科月桂属亚热带树种, 原产于地中海沿岸, 我国的江苏、 浙江、 四川、 山东、 陕西、福建及云南等省有大量栽培 [1]。月桂叶香气浓 郁,能够去除肉类的腥味,常作为中式菜肴、法式料 理、肉制品、鱼类和罗宋汤、洋葱汤等汤羹最基本的 调味香料之一,同时也是制作咖喱粉必不可少的原料 [2]
。从月桂叶中提取的挥发油具有较高的药用价值,
270
收稿日期:2015-09-04
基金项目:天津市自然科学基金重点项目(12JCZDJC34100) 作者简介:杨云舒(1991-) ,女,硕士,研究方向:食品添加剂 通讯作者:姜子涛(1956-) ,男,博士,教授,研究方向:食品添加剂
可用于治疗胃痛、风湿病和消化不良等病症 [3],并具
有抗菌 [4,5]、抗病毒 [6,7]和抗氧化活性 [8]。此外,月桂叶 水提物可作为止泻剂, 用于肠胃疾病的治疗 [9]。 目前, 国内外对月桂挥发油的提取、抗氧化活性以及化学成 分的研究已有诸多报道 [1,10~16],但对月桂叶中黄酮类 成份研究甚少,中国产月桂叶中黄酮类化合物成分尚 未见报道。 Dall'Acqua 等 [17]对意大利产月桂叶中的黄 酮类化合物进行了分离分析, 从中鉴定出了 10种黄酮
类成分。 Kang 等 [18]的研究显示,
月桂叶中所含的黄酮 类化合物对烷基过氧化自由基有非常强的清除作用。 Marino 等 [19]则测定了月桂叶经甲醇提取得到的 2种黄
酮类成分对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞所产生一氧化氮 的抑制作用。
液相色谱 -质谱联用(Liquid Chromatography- Mass Spectrometer, LC-MS) 技术将高效的色谱分离技 术与能够特异性的识别 MS/MS碎片的串联质谱技术 结合,同时具有高灵敏度、高选择性及图谱简单等特 点,目前已被广泛应用于植物、食品及复杂有机化合 物的成分分析。 本文利用液相色谱 ? 四级杆 ? 飞行时间 串联质谱 (LC-Q-TOF-MS ) 、 液相色谱 ? 三重四级杆串 联质谱 (LC-MS/MS) 、 标准品比较和图谱解析的方法, 对月桂叶中的黄酮类化合物进行了定性和定量分析, 同时测定了月桂叶黄酮对 DPPH 自由基的清除能力, 为月桂叶的综合利用奠定了理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
月桂叶购自广西河池市, 按照文献 [20]的方法并做 适当修改提取黄酮,冷冻干燥得到月桂叶黄酮粉末, 以备分析检测用; DPPH (分析纯) , 美国 Sigma 公司; 甲醇(色谱纯) ,德国 Merck 公司。牡荆素鼠李糖苷、 芦丁、牡荆素、表儿茶素、金丝桃苷、紫云英苷、槲 皮苷、槲皮素和山奈酚等标准品(纯度均大于 98%) , 天津一方科技公司。
1.2 仪器与设备
Agilent 6520 LC-Q-TOF 液相色谱 ? 四级杆 ? 飞行 时间串联质谱(LC-Q-TOF-MS ) ,美国 Agilent 公司; Agilent G6410A LC-MSD QQQ液相色谱 ? 三重四级杆 串联质谱(LC-MS/MS) ,美国 Agilent 公司; U-3900紫外可见分光光度计,日本日立公司。
1.3 方法
1.3.1 LC-Q-TOF-MS定性分析
色谱条件:ZORBAX SB-C18 色谱柱(250×4.6 mm , 5 μm ) ,柱温 30 ℃,流速 0.3 mL/min。流动相 A 为含有 0.1%甲酸的甲醇溶液, B 为含有 0.1%甲酸 的水溶液,样品液和混合标准品的进样体积均为 5 μL 。 流动相 A 的梯度为:0~7 min, 20~30%, 7~10 min, 30~30%, 10~17 min, 30~72%, 17~30 min, 72~72%。 质谱条件为:电喷雾 Dual-ESI 离子源, 负离子模式下 采集数据,离子源温度 350 ℃,干燥气流速为 10 L/min,数据采集范围 m/z 100-1000,毛细管电压为 3500 V, Fragmentor 电压 175 V, Skimmer 电压为 35 V。 通过对比现有标准品的保留时间以及 MS1、 MS2数据 确定月桂叶黄酮中的 9种成分,其余 7种成分通过对 比参考文献进行推断。
1.3.2 LC-MS/MS定量分析
色谱条件与 1.3.1节相同。质谱条件:离子源为 电喷雾 ESI 负离子源, 喷雾电压 4000 V, 雾化气流速 10 L/min, 离子源温度 350 ℃, 雾化气体和碰撞气体 均为高纯氮气(纯度 >99.99%) 。采用多重反应监测模 式(MRM ) ,对特征碎片离子进行检测。对有标准品 的 9种黄酮物质采用外标法进行定量,对其它 7种黄 酮成分采用对比定量法进行定量。
1.3.3 清除 DPPH 自由基的测定
参照文献 [21]的方法进行。配制浓度为 0.05-0.25 mg/mL的月桂叶黄酮样品液和维生素 (Vc ) 溶液。 在 具塞试管中加入浓度为 1.0×10-4 mol/L的 DPPH 溶液 3.5 mL和无水乙醇 0.5 mL, 闭光静置 30 min, 测定其 在 517 nm下吸光度 A1;在具塞试管中加入 1.0×10-4 mol/L的 DPPH 溶液 3.5 mL和样品液 0.5 mL, 闭光静 置 30 min,测定其在 517 nm下吸光度 A ;在具塞试 管中加入 3.5 mL无水乙醇与 0.5 mL样品液,测定其 吸光度 A0。试验重复 3次,取平均值。则样品液对 DPPH 自由基的清除率为:
%
100
)
1
1
0×
?
?
=
A
A
A
(
清除率 (1) 1.4 数据统计分析
使用 Agilent MassHunter工作站软件 -定量分析程 序(B.07版本)进行月桂叶黄酮的定量数据分析,使 用 SAS (9.2版本)进行数据的统计分析。所有测定 进行 3次。
2 结果与讨论
2.1 LC-Q-TOF-MS定性分析
根据方法 1.3.1进行 LC-Q-TOF 分析,得到月桂 叶黄酮及标准品的总离子流图。 图 1a 为月桂叶黄酮的 总离子流图, 图 1b 为标准品的总离子流图。 在相同的 分析条件下, 9种标准品与相应的黄酮成分具有相同 的保留时间、 分子离子和二级质谱碎片, 分别为峰 1-3、 5、 8、 10、 13、 15和 16。在图 1a 中没有标准品的其 他峰,通过二级质谱分析和相关文献进行了鉴定。黄 酮的分析结果见表 1。
峰 4显示分子离子峰为 m/z 863,碎片离子中含 有 m/z 289和 573,根据 Passos 等 [22]和刘亮等 [23]的研 究,在负离子模式下产生 m/z 289的碎片离子的化合 物为上端为 A-型结构的原花青素三聚体,比 B-型原 271
花青素三聚体少了两个质子。因此,推断峰 4为 A-型结构的原花青素三聚体。其裂解途径如图 2所示。
272
图 1 月桂叶黄酮及标准品的总离子流图
Fig.1 Total ion chromatograms of the flavonoids and the mixture of
reference standards
图 2 A-型结构的原花青素三聚体裂解途径 Fig. ns
2 Fragmentation pathway of type-A procyanidi
图 3 山奈酚-3-O -芸香糖苷裂解途径
Fig.3 Frage
峰, 二 显示 mentation pathway of kaempferol-3-O -rutinosid 峰 6在负离子模式下显示为 m/z 593的分子离子 级质谱扫描显示有一个 m/z 285的碎片离子 (山 奈酚) , 这是由在碰撞中母离子失去了 m/z 308的中性 离子即芸香糖苷造成的,对比相关文献 [24],推断峰 6
为山奈酚 -3-O-芸香糖苷。其裂解途径如图 3所示。
峰 7的母离子 [M-H]-为 m/z 623,二级质谱分析 了 m/z 315的异鼠李素母离子特征碎片,这证明 丢失了一个芸香糖基,根据先前的研究 [25,26],峰 7可 以被鉴定为异鼠李素 -3-O -芸香糖苷。 其裂解途径如图 4所示。
图 4 异鼠李素-3-O -芸香糖苷裂解途径
Fig.4 Fragutinoside
与峰 mentation pathway of isorhamnetin-3-O -r 峰 9在负离子模式下的分子离子峰为 m/z 447, 10紫云英苷的碎片完全相同, 保留时间接近, 因 此推断为紫云英苷的同分异构体。由于紫云英苷是山 奈酚 -3-O-葡萄糖苷,根据文献 [27]推断峰 9为山奈酚 -7-O -葡萄糖苷。其裂解途径如图 5所示。
图 5 山奈酚-7-O -葡萄糖苷裂解途径
Fig.5 Fralucoside
显 示了 gmentation pathway of kaempferol-7-O -g 峰 11的母离子 [M-H]-为 m/z 433, MS/MS分析 一个 m/z 301(槲皮素) 的主碎片, 表明丢失了一 个戊糖基,对比文献 [28],峰 11可以被推断为槲皮素 -3-O -木糖苷。其裂解途径如图 6所示。
图 6 槲皮素-3-O -木糖苷裂解途径
Fig.6 Fragmpyranoside
显示 模式下显示为 m/z 431的分子离子 峰, entation pathway of quercetin-3-O -xylo 峰 12显示分子离子峰为 m/z 477,二级质谱扫描 了 m/z 315的异鼠李素母离子特征碎片,这证明 丢失了一个中性离子六碳糖苷, 根据先前的研究 [29,30], 峰 12可以被鉴定为异鼠李素 -3-O -葡萄糖苷。其裂解 途径如图 7所示。
峰 14在负离子 二级质谱分析显示了 m/z 285的异鼠李素母离子 特征碎片,表明在碰撞过程中丢失了一个鼠李糖苷, 根据本课题组前面的研究 [31],推断峰 14为山奈酚
-3-O -鼠李糖苷。其裂解途径如图 8所示。
图 7 异鼠李素-3-O
-葡萄糖苷裂解途径
273
Fig.7 Fragmentation pathway of isorhamnetin-3-O-glucoside
图 8 山奈酚-3-O -鼠李糖苷的裂解途径
Fig.8 Fragmentation pathway of kaempferol-3-O -glucoside
2.2 LC-MS/MS定量分析
根据方法 1.3.2进行 LC-MS/MS定量分析。在 MRM 模式下,对于有标准品的 9种黄酮采用标准曲 线法定量,对于没有标准品的另外 7种黄酮采用对比
定量方式进行定量,结果见表 1。可见在适当的浓度 范围内, 9种黄酮标准品的线性回归结果都显示了良 好的线性相关,相关系数在 0.991~0.999之间。黄酮 化合物的检出限介于 0.10~14.80 ng/mL之间, RSD 值 在 0.78~3.67%范围内。 证明此方法具有较高的灵敏度 和良好的精密度。另外,标准品的回收率范围介于 94.42~107.31%之间,表明方法具有较高的准确性。
2.3 清除 DPPH 自由基的能力
图 9 DPPH自由基清除率与样品液浓度的关系
Fig.9 Relationship between scavenging rate of DPPH radical and
concentration of sample solution
表 1 月桂叶黄酮各成分的保留时间、碎片离子和定量结果
T able 1 Retention time, fragment ions and quantitation results of each compound of the flavonoids in L. nobilis leaves
峰号 黄酮成分 [M-H]? /(m/z) RT /min
MS 2 /(m/z)
标准曲线
线性范围 /(μg/mL)
R
2
含量 a /(μg/g)
回收率 a
/%
1 牡荆素鼠李糖苷
577 9.93 413, 293 Y =-10964+9017X0.10~10.000.998 1658.53±56.9 105.24±3.232 芦丁 609 9.93 301, 300 Y =-3392+17337X0.50~10.000.998 19883.54±494.33 107.31±2.573 牡荆素 431 10.00 311, 341 Y =12877+12484X
0.10~6.000.995 4430.87±89.72 103.82±3.41
4 A 型原花青素三聚体
863 10.13 289, 573, 711- - -
2281.88±78.90 b - 5 表儿茶素 289 10.19 123, 109, 137Y=1130+8528X
0.05~4.000.998
148.10±2.32
96.35±2.06
6 山奈酚 -3-O -芸香糖苷
593 10.19 285, 284 - - - 3491.02±47.98 b - 7 异鼠李素 -3-O -芸香糖苷 623 10.26 315,
314 - - - 6643.78±99.04 b - 8 金丝桃苷 463 10.72 300, 301, 271Y=169852+15585X0.10~10.000.999 11979.66±317.79 98.72±1.29
9 山奈酚 -7-O -葡萄糖苷
447 11.88 284, 285, 255-
- -
738.55±10.86 b - 10 紫云英苷 447 12.34 284, 285, 255Y=46038+52593X
0.05~6.000.991
508.60±6.96
106.46±3.74
11
槲皮素 -3-O -木糖苷
433 12.47 300, 301
- - - 2044.22±57.65 b -
12 异鼠李素 -3-O -葡萄糖苷 477 12.47 315, 300, 271-
-
-
2079.94±76.38 b - 13 槲皮苷 447 12.93 300, 301, 271Y=34036+70253X0.10~10.000.994
3777.80±61.84
103.42±2.83
14 山奈酚 -3-O -鼠李糖苷
431 14.95 285, 284 -
-
- 6412.37±78.65 b -
15 槲皮素 301 20.89 151, 179, 121Y=50785+66371X1.00~10.000.991 1629.45±47.65 94.42±2.3716
山奈酚
285 24.88 205, 206, 185
Y=612+4889X 0.05~4.000.997
364.29±2.84
103.82±3.41
注:“ a Mean±SD, b 对比物为牡荆素。
按照 1.3.3中方法,测定样品溶的吸光度,根据
公式 (1)计算各样品液和 Vc 对 DPPH 自由基的清除率, 结果如图 9所示。 当加入抗氧化剂时, 能观察到 DPPH 溶液明显褪色,这是因为其孤对电子被配对造成了在
517 nm下吸收减弱, 其褪色程度与自由基清除剂的活 性有关 [32]。由图 9可知,月桂叶黄酮和 Vc 对 DPPH
现代食品科技 Modern Food Science and Technology
2016, Vol.32, No.7
274
自由基的清除作用随浓度的升高而增加。在低浓度时 两者的清除率相差比较大,随着浓度的升高,差距减 小。虽然总体上来说月桂叶黄酮清除自由基的能力低 于 Vc ,但其也具有良好的清除自由基能力(IC50值 为 0.08 mg/mL) 。
3 结论
本文首次从中国月桂叶中分离鉴定出了 16种黄 酮化合物,其主要成分是芦丁(19883.54±494.33 μg/g) 、金丝桃苷(11979.66±317.79 μg/g) 、异鼠李素 -3-O -芸香糖苷(6643.78±99.04 μg/g) 、山奈酚 -3-O -鼠 李糖苷 (6412.37±78.65 μg/g) 、 牡荆素 (4430.87±89.72 μg/g) 、山奈酚 -3-O -芸香糖苷(3491.02±47.98 μg/g) 和 A-型原花青素三聚体(2281.88±78.90 μg/g) 。通过 清除 DPPH 自由基实验证实,月桂叶黄酮具有良好的 清除自由基能力。
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