STANDARD OPERATING PROCEDURE
氨基氮含量检查法
第一次复审日期:2007年 月 日
1. 目的:对抗生素的中间体进行氨基氮的测定来进行生产的控制。
2. 范围:车间化验室
3. 责任:车间QC化验室化验员与技术人员
4. 化验原理:含有NH4+的化合物[(NH4)2 SO4]与甲醛作用,以等量关系产
生H2SO4,以标准碱液滴定能换算出(NH4)2 SO4含量。
5. 程序:
5.1 样品测试:吸取发酵过滤液2ml于100ml三角烧瓶中,加入10ml蒸馏水,
然后加入甲基红指示剂三滴,0.15mol/L硫酸试剂一滴,以0.02mol/L氢氧化钠标准溶液滴至红色消失,而呈棕黄色,
1
再加入18%中性甲醛试剂2ml及酚酞指示剂4-5滴,后用0.02mol/L氢氧化钠标准溶液滴至呈红色终点。
5.2 氨基氮的计算:
mol/L×V×0.014
氨基氮mg/100ml=———————— ×100%
2
公式中:V:指滴定所用的氢氧化钠标准溶液体积(毫升)
mol/L:指氢氧化钠标准溶液浓度
6. 注意事项:
6.1 滴定所用的甲醛每天使用前调节至中性。
6.2 终点观察最好用白色背景。
6.3 发酵后期如果滤液颜色太深,可适量多加一些水使终点清晰。
7. 试剂配制。
7.1 18%甲醛试剂:用500ml浓甲醛加蒸馏水稀释至1000ml即可,若有黄
标 准 操 作 规 程
STANDARD OPERATING PROCEDURE
氨基氮含量检查法
色沉淀,应过滤后使用,使用前用酚酞指示剂滴定至中性(本品应易发生聚合作用而结块沉淀,故不应存放于冷冻环
2
境)。
7.2 0.02mol/L氢氧化钠,由质检科配制。
7.3 甲基红指示剂:取甲基红0.1克加100ml酒精混合均匀即可(变色范围为
PH4.2-6.2,由红色至黄色)。
7.4 酚酞指示剂:取酚酞1g加100酒精,混合溶解即可(变色范围PH8.3-10.0,
由无色至红色)。
7.5 0.15mol/L硫酸溶液:取4.2ml,C.P浓硫酸缓缓注入加蒸馏水的试剂瓶中,定量至500ml,即可。
百度搜索“就爱阅读”,专业资料,生活学习,尽在就爱阅读网92to.com,您的在线图书馆
3
酱油氨基氮含量的测定
验三酱油氨基氮含量的测定
一、目的与要求1
.
了解测定氨基氮含量的意义
2
.
掌握测定氨基氮的原理和方法
二、实验原理
氨基酸含有氨基和羧基,
在测定时,
加入甲醛固定氨基酸的碱性氨基,
使其羧基游离显
示酸性,用标准氢氧化钠溶液滴定所生成的酸,可以求出氨基氮的含量。 R
-
CH
-
COOH +
HCHO= R -
CH
-
COOH NH
2
NH
-
CH
2
OH
R
-
CH
-
COOH R
-
CH
-
COONa
+
NaOH= +
H
2
O
NH
-
CH
2
OH
NH
-
CH
2
OH
三、试剂与仪器 (一)
试剂
1
.
1%
酚酞乙醇溶液
2
.
0.1N
氢氧化钠标准溶液
3
.
中性甲醛溶液
:
取
36%
甲醛加酚酞指示剂
滴,
用
0.1N
氢氧化钠溶液滴定至刚显微 红色。
4
.
酱油
(二)
仪器
移液管(
5ml
、
10ml
)
、容量瓶(
100ml
)
、烧杯(
250ml
)
四、操作步骤
1
.
准确吸取酱油
5ml
,置于
100ml
容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀。
.
准确吸取此稀释液 10ml
于
250ml
100ml
,加入酚酞指示剂 3
滴,
用
0.1N
氢氧化钠标准溶液滴定至初现微红色,不用记录用量。 3
.加入
36%
中性甲醛
10ml
,摇匀,放置一分钟,再用
0.1N
氢氧化钠标准溶液滴定至
呈微红色,记录滴定氢氧化钠标准溶液的毫升数。 4
.作平行实验
五、计算
100
100
10
5
014
.
)
100
/
N
V
lm
g
(氮基氨
式中:
V
为滴定时氢氧化钠标准溶液的消耗量( ml
)
N
为氢氧化钠标准溶液当量浓度 0.014
为
1N
氢氧化钠标准溶液 1ml
相当氮量( g
)
食醋中氨基氮含量的测定报告
QS NO 2012004
专业:
课程:
班级:
姓名:
学号:
实 验 报 告 重庆工业职业技术学院化工系
实验一:酱油,食醋中氨基醇态氮含量的测定
实验目的:
1、掌握醇态氮含量测定的原理和意义。
2、熟悉氮含量的操作方法。
实验原理:
酱油氨基氮测定:根据氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,以酚酞为指示剂,用氢氧化钠进行酸碱滴定测定出羧酸,从而推出氨基氮的含量。
食醋中氨基氮测定:先用氢氧化钠滴定食醋中的乙酸,根据氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,以酚酞为指示剂,用氢氧化钠进行酸碱滴定测定出羧酸,从而推出氨基氮的含量。
实验仪器及试剂:
试剂:
酱油、食醋、氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾、甲醛、酚酞。
仪器:
100ml 容量瓶*1、500ml 容量瓶*2、碱式滴定管、试剂瓶
5ml 移液管*1、10ml 移液管*1、50烧杯若干、玻璃棒等
实验步骤:
酱油
试剂配制:
1、酱油样品:吸取酱油5.00ml 稀释至100ml 。
2、中性甲醛:取200ml 甲醛以酚酞为指示剂,用氢氧化钠(0.05mol/L)滴定至粉红色。
3、、酚酞指示剂:取酚酞1g ,加乙醇100mL 使之溶解,既得。
4、氢氧化钠(0.05mol/L)试液:
配制:称取取NaoH 1.0g至500ml 容量瓶定容。
标定:称取干燥过的邻苯二甲酸氢钾0.16g ,以酚酞为指示剂,用氢氧化钠进行滴定至溶液呈现粉红色。平行三个样。计算氢氧化钠浓度。
c =m ?1000
M ?V
式中:
m ——邻苯二甲酸氢钾质量,g ;
M ——邻苯二甲酸氢钾物质的量,g/L;
V ——消耗的氢氧化钠体积,mL
(1)试样滴定
吸试液20.00mL 于250mL 烧杯中, 加水60mL ,放入磁力转子,开动磁力搅拌器使转速适当。再将酸度计的电极插入到上述酱油液中,用NaOH 标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2, 记下消耗的NaOH 溶液体积。
在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.00mL 的中性甲醛溶液,用NaOH 标准溶液滴定至pH9.2, 记下消耗的NaOH 溶液体积。
(2)空白滴定
吸取80mL 蒸馏水于250mL 的烧杯中,用NaOH 标准溶液滴定至pH8.2, 然后加入10.00mL 中性甲醛溶液,再用NaOH 标准溶液滴定至pH9.2, 记下加入甲醛后消耗的NaOH 溶液体积。
食醋
试剂配制:
1、中性甲醛:取200ml 甲醛以酚酞为指示剂,用氢氧化钠(0.05mol/L)滴定至粉红色。
2、食醋试液:取食用醋2.5ml ,加水稀释至100ml ,既得。
3、酚酞指示剂:取酚酞1g ,加乙醇100mL 使之溶解,既得。
4、氢氧化钠(0.05mol/L)试液:称取NaoH1.0g 至500ml 容量瓶定容。标定同上。
(1)试样滴定
吸取试液5.00mL 于250mL 烧杯中, 加水100mL ,以酚酞为指示剂用NaOH 标准溶液滴定至酚酞为粉红色,记下消耗的氢氧化钠体积V 1。加入10ml 中性甲醛,
以酚酞为指示剂用NaOH 标准溶液滴定至酚酞为粉红色,记下消耗的氢氧化钠体积V 2。
(2)空白滴定
吸取105mL 蒸馏水于250mL 的烧杯中, 以酚酞为指示剂用NaOH 标准溶液滴定至酚酞为粉红色,记下消耗的氢氧化钠体积V 1。加入10ml 中性甲醛,以酚酞为指
示剂用NaOH 标准溶液滴定至酚酞为粉红色,记下消耗的氢氧化钠体积V 2。 C =C NaOH ?V NaOH ?0. 014
0. 125?100
式中:
C ——食醋中氨基氮的含量,mg/100mL;
C NaOH ——氢氧化钠浓度,mol/L;
V NaOH ——消耗的氢氧化钠体积(V 2-V 1),mL ;
0.125——食醋的取用质量,g ;
0.014——氮的毫摩尔质量,g/mmol。
结果与讨论:
结果:
该食醋中氨基氮的含量为0.1603mg/100mL;
讨论:
1、实验中所使用的食醋浓度过高会影响滴定时候的颜色观察,浓度过低的话滴定误差大。
2、添加的中性甲醛量必须过量才能将食醋中的氨基氮固定,使溶液显示为酸性。
3、食醋中的氨基氮含量测定前,需要用氢氧化钠将试液中的乙酸中和完全。 附录:
另附原始记录、检验报告单。
发酵液中氨基氮含量的测定
发酵液中氨基氮含量的检验
一、基本原理
氨基酸是有氨基与羧基得两性化合物,在溶液中以两性离子状态存在。如下: R-CH--COO -+2HCHO
-NH 3是弱酸,完全解离时pH 在11-12之间或者更高,若用碱滴定- NH 3释放出来的H +来测定氨基酸,一般指示剂的变色范围<10,很难指示滴定终点。
但是用甲醛处理后,由于甲醛能与氨基结合使氨基上的氢离子游离,使溶液中的酸度增加,滴定中和终点移至酚酞的变色区域内(8.0-10.0)。因此可用酚酞作指示剂,用碱来滴定,从而计算氨基酸的含量。
二、试剂
1mol/l盐酸,0.1mol/l氢氧化钠标准溶液,0.5mol/l氢氧化钠标准溶液,12%中性甲醛,0.2%甲基红指示剂,1%酚酞指示剂。
三、仪器及器具
100ml 三角瓶,10ml 刻度吸管,25ml 刻度吸管,碱式滴定管
四、操作步骤
取发酵离心上清液2.5ml 至100ml 三角瓶中,加水50ml ,甲基红指示剂2滴,1mol/l盐酸1-2滴,调节溶液至红色,静置5分钟,再用0.5mol/l的氢氧化钠标准溶液调节溶液至橙色(体积不计),使呈中性。加12%中性甲醛10ml(每次用之前用氢氧化钠溶液调至微红色,酚酞作为指示剂) ,摇匀静置10min, 加1%酚酞指示剂5滴,用0.1mol/l氢氧化钠溶液滴定至微红色为终点。
五、计算
氨基氮(mg/100ml)=C ×V ×14.01×100/2.5
C:氢氧化钠滴定液浓度,mol/l
V :氢氧化钠滴定液消耗体积,ml
实验三酱油氨基氮含量的测定
实验三 酱油氨基氮含量的测定
一、目的与要求
1. 了解测定氨基氮含量的意义
2. 掌握测定氨基氮的原理和方法
二、实验原理
氨基酸含有氨基和羧基,在测定时,加入甲醛固定氨基酸的碱性氨基,使其羧基游离显示酸性,用标准氢氧化钠溶液滴定所生成的酸,可以求出氨基氮的含量。
R -CH -COOH +HCHO= R-CH -COOH
NH 2 NH -CH 2OH
R -CH -COOH R -CH -COONa
+ NaOH= + H 2O
NH -CH 2OH NH -CH 2OH
三、试剂与仪器
(一) 试剂
1. 1%酚酞乙醇溶液
2. 0.1N 氢氧化钠标准溶液
3. 36%中性甲醛溶液:取36%甲醛加酚酞指示剂4滴,用0.1N 氢氧化钠溶液滴定至刚显微红色。
4. 酱油
(二) 仪器
移液管(5ml 、10ml )、容量瓶(100ml )、烧杯(250ml )
四、操作步骤
1. 准确吸取酱油5ml ,置于100ml 容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀。
2. 准确吸取此稀释液10ml 于250ml 烧杯中,加蒸馏水100ml ,加入酚酞指示剂3滴, 用0.1N 氢氧化钠标准溶液滴定至初现微红色,不用记录用量。
3.加入36%中性甲醛10ml ,摇匀,放置一分钟,再用0.1N 氢氧化钠标准溶液滴定至呈微红色,记录滴定氢氧化钠标准溶液的毫升数。
4.作平行实验
五、计算
氨基氮(g /100ml ) =V ?N ?0. 014?100 105?100
式中:V 为滴定时氢氧化钠标准溶液的消耗量(ml )
N 为氢氧化钠标准溶液当量浓度
0.014为1N 氢氧化钠标准溶液1ml 相当氮量(g )
实验一 电位滴定法测定食品中氨基酸含量
酱油中的氨基酸态氮是氨基酸含量的特征指标,含量越高酱油的鲜味越强,质量越好。国家标准GB18186-2000规定,高盐稀态发酵酱油(含固稀发酵酱油)的氨基酸态氮(以氮计)每100ml 酱油中的含量:特级、一级、二级和三级分别应 ≧0.8g 、0.7g 、0.55g 和0.4g 。低盐固态发酵酱油中的含量:特级、一级和二级分别应 ≧0.8g 、0.7g 和0.6g 。配制酱油(SB 10336-2000)每100ml 中氨基酸态氮含量应 ≧0.4g 。在所有酱油的卫生指标中,总酸(以乳酸计)含量每100ml 中应≦2.5g 。