2.1 实验材料
2.1.1实验动物:
蟾蜍,大二院实验动物中提供,雌雄不限,体40±5g ,
2.1.2实验药品:
0.0825mg/ml的三唑磷溶液,0.165mg/ml的唑磷溶液,0.33mg/ml的三唑磷液,实验前由广用三唑磷杀虫剂配置。任氏液,实验前配置好。 2.1.3实验器
⑴SMUPP-E 生物信号处理系统(Model SMUP-E.Bio-electric Signals Processing System 复旦大学上海医学院生理与病理生理学研制) 。 ⑵ 张力
⑶hp caserjet 1000型打印机
⑷常手术器械(手术、手术镊、手术刀、金冠剪、
⑸其:肌动器、腊盘、板、玻璃板、固定、培养皿、污
2.2 试验方法
2.2.1实验内容
实验分四组进行:第一组,对照实验,在不用三唑磷溶处理的情况下,测量蟾蜍腓肌的单收缩,并记测量单收缩过程的伏期、收缩、舒张期的间, 收缩幅度, 大收缩力;第二组,用0.0825mg/ml的三唑磷溶液环境影响蟾蜍一段时间后制备腓肠肌标本,第三组用0.165mg/ml的三唑磷溶液
蟾蜍一段时并制备腓肠标本,第四组用0.33mg/ml的三唑磷溶液环境影响蟾蜍一时间并制备腓肠肌标,分别测量记录单收过程的潜伏期(ms ), 收期(ms ), 舒张期的时间(ms ), 最大缩力(收缩幅度)(g);并计算:缩速率=收缩幅度/收时间(g/ms),舒张率=收缩幅度/舒张时间(g/ms);然后分求出加三唑磷溶液前和用三唑磷溶液影响后4个单收缩曲线的最大收缩力、收缩速率、舒张速率的平均值; 最后通过生物统计学软件数据处理,进行对比分析,得出
2.2.2实验过程
⑴破坏蟾蜍脑脊髓
取蟾蜍一只用自来水冲干净, 左手蟾蜍, 小指和无名指夹住后肢, 拇按压背部, 中在胸腹部, 用指下压头部前端使头前俯, 右持金属探针由枕骨沿线向脊柱端触, 当触到凹陷处枕骨大孔处, 可将探针由垂直刺入皮肤, 枕骨孔后将针折前方插入颅腔并左右搅动毁脑组织, 而后退针至刺入点皮下, 针尖向后刺入脊椎管捣毁脊髓, 当四肢松软, 呼吸消失则表示脑脊髓完全毁坏, 否则应按上法重
⑵
①剪除躯干上部内脏 在髂关节水平以上1cm 用粗剪刀剪脊柱, 手执镊子夹紧脊柱端(骶骨端) 并向上提起, 使蟾蜍的与内脏自然下垂, 右手持大剪刀, 沿两侧蟾蜍的头, 前肢和内脏全部剪除并弃置污物桶内, 仅保留后肢, 腰背部脊柱及由它发出的坐骨神经丛(呈灰白
②剥皮 手大镊子夹住脊柱断端, 要夹住触及神经, 右手捏其上的皮肤边缘, 向
③将及用过的剪子, 镊子, 蛙板等部手术器械
④分离两腿 用镊从背位夹住脊柱将标本提起, 用大刀剪去向上突的骶骨(勿伤坐骨神经), 然后沿正中将脊柱分为两半并耻骨联合中央剪开两侧大腿, 使两腿完全分离, 将两腿浸于盛有任氏液的烧
⑤游坐骨神经 取后肢, 腹面向上, 在
定在蛙板上, 沿柱侧用玻璃分离坐骨神经, 然后用玻璃针轻勾起坐骨神经, 逐一剪断其经分支, 用粗剪刀剪脊柱, 保留一块与坐神经相连的椎骨. 再将标背侧向上固定于蛙板上, 用镊子提起梨状肌剪断, 沿坐骨神经沟(股二头与半膜肌之间的裂隙处) 分离出大腿部的坐骨神经并用玻璃针轻轻勾起坐骨神经干, 剪断所有分支一直游离至腘窝
⑥用镊子住脊椎, 将神经搭在腓肠肌上, 用刀将膝关节围的大腿肉剪除, 将膝节上方的骨刮于净, 暴股骨并在距膝关节上1cm 处剪断. 保留部分即是坐骨神经-腓肠肌标
⑦在跟腱处穿线结, 剪断结线以下靠近脚趾端的跟腱. 左提起结扎线, 手用玻璃分分离腓肠肌至膝关节处在膝关节处将小腿其余分全部剪掉, 即制备出一个有附着在股骨上的腓肠和带有支配腓肠肌坐骨神经本. 将浸有任氏液
⑶
①
②
⑷
①
②采样窗参数设置点击捷工具栏上的“采样条件设置”快捷按钮,打“采样条件设置”窗口,“显示模”为“记示波”,样间隔为25微,触发方式为刺器触
③刺激参数设置
“刺激方式”选“单激”, 刺激器参数为:刺激时间(s ):0.30,冲宽度(ms ):0.50, 冲强度(v ):1.60, 刺激
⑸
将制好的蟾蜍坐神经-腓肠肌标本标本
股骨头固定在肌的骨头固孔内,神经搭在肌槽电极,腓肠肌肌腱的扎线与力换能器接头相连,换能器输出端与计机1通道,刺激电极与坐神经相连,电极接与计算机程控刺器输出相连。调节好扎线的张力,不可过松或过紧,以使肌肉自然拉平为宜(保证肌肉一旦收缩,即可牵动张力传感器的应变
蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备
蟾
目的要求:
1、学习蛙类动物双毁髓的方法。
2、握蛙类腓肠肌与坐骨神经,腓
3、掌握神经和肌肉组织的分离方法。
动物与器材:
(省略)
实验分组与要求:
1、2人一只蟾蜍,分别各自独立制备一个
腓肠肌标本。
、标做好以后,让教师检查,然
方法步骤:(由教师简要提示,
1、持握蛙的方法。
2、单毁髓或双毁髓的方法。
3、下肢粗标本的制备。
4、分离坐骨神经。
5、游离腓肠肌:分离股骨
6、检验标本的活性。
注意事项:
(参见实验指导)
实提问与思考:(用于课
1、皮肤后的下肢粗标本,可以用
2、己总结一下,怎样才能保证
3、什么在分离神经干时不允许用
4、己查一下教材,任氏溶液是一种什么溶
5、考:当刺激某
肉时腓肠肌则不收缩或者收缩
6、什么制备标本时要毁坏脊髓
7、怎样判断将脊髓中枢毁坏彻底了,
8、完整的坐骨神经腓肠肌
9、坐骨神经腓肠肌标本的每一
10、其他在实验作过程中学生出现的问
制备的标本不毁坏丢掉~可用于“电刺激
时间。
蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备
生
实二 蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备 一.
1.掌握急性实验动物实体/离体组织器官的处理
2.掌握各种手术器材的使用方法,特别是剪刀的操
3.理解实验时是如何模拟生物体的内环境来维持实验系统的; 4.了解麻醉和毁髓的理意义并学
5.理解并掌握锌铜弓测定可兴奋组织的原理和
6.了解静息电位和动作电位的发生
二. 实验原理
1.类的些本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处,而且其离体组织的生活条件比较简单,易于控制和掌握,源较丰,因此在生理学实验,常用蛙或蟾蜍的骨神经腓肠肌标来观察神经肌肉的兴奋性、激与反
2.氏液是种来模拟两栖动物内环境的液体,可用来延长青蛙心脏在体 外跳动时间、持两栖类其他离体组织器官生理活性等,其配制方法氯化6.5g,氯化钾0.14g,氯化钙0.12g,碳酸氢钠0.20g,酸二氢钠0.01g,葡萄糖2.0g(
3.锌弓由金属锌铜接而成,锌铜弓在极性溶液中形成回路,锌与铜两极产生约0.5~0.7V的直流电压,因此可用来刺激神经和肉,使神经或肌肉兴奋。这种刺激仅在锌铜弓与神经或肌肉接触瞬间产生,持续触不使经或肌肉,铜弓常用来检查离体神经肌肉的兴奋性。坐骨神经腓肠肌标本制完成时,将锌铜弓用任氏液蘸湿迅速接触坐骨神经,引起腓肠肌收。 +2+铜构成原
,,ΘΘ故该原电池所形成的电压计算公式为:E=E-;,,,其中E表示在298K时电,,
+2+Θ=ΘΘ池的标准电动势,Eφ(H/H)-φ(Zn/Zn),R表摩尔气体常
力温度,z表示电极反应所得失的电子数,F为法拉第常,Q表
4.静息电位和动作
静息位是细未受刺激时,存在于质膜内外两侧的外正内负的电位差。它是一生物电产生和变化的基础。在质膜的外表面有薄层离子,内表面有一薄层负离子,两层之间可形很大的电位梯度,成这种状态的基本原因是离跨膜
动作电位指在静息电位础上,给细胞一个适当的刺激,所触发其产生可传播的膜位波动。能引发动作电位的最小刺激强度成为的阈值,当刺激达到阈值时,即可触发动作电位,其度立刻达到该细胞动作电位的最大值,不会随着刺激强度的增大而增大。动作电位产生后会沿着质膜速向周传,直至整个胞一次生一次动作电位。动作电位的产生是由于离子跨膜动引起的膜内外表层电荷的改变,主要是钾和钠离子。动作电位的幅度决定于细内外的钠离子浓度差,细胞液钠离子浓度降低作电位幅度相降,而阻断离通道(河豚毒素)则能阻碍动作电位的产生。 三. 实
生科学学院生理学实验 1.
2.实验器材:蜡盘、骨剪、手术剪、手术镊、金冠剪、眼剪、眼科
玻分针、固定针、锌铜弓、培养皿、粗棉线、大烧杯; 3.实验试
四. 实验步骤
1.毁髓:取蟾蜍一只,手指和无名指夹住蟾蜍的前肢,无名指和小拇指夹后肢,以食指压其头部前端使其前倾,右手髓针自枕骨大孔处垂直入,进针深度约2mm,有脱空感即到达椎管,随即将探针改变方向向上刺入颅腔,向各侧不断搅动,彻底捣毁脑组织;将探针下向尾侧,动针捣脊髓。此时蟾蜍下颌呼吸运动消失,四肢松软,水将毁髓后的蟾蜍冲洗干净; 2.剪除躯干上部及内脏:用粗剪刀在胯上方剪断脊柱。左手握住蜍下肢,大拇指抵脊柱尾骨,右手剪刀沿脊两(避开坐骨神经)剪开腹壁。剪除全部躯干上部及内脏
3.剥皮:避开神经,左手捏住脊柱,右手捏住皮肤边缘,向下牵拉离皮,使得皮肤
4.分离腓肠肌-坐骨神
1)用剪分离股骨上的肌肉,并找到肌肉之间的坐骨神经,用神经分针轻轻挑起坐神经,用眼科剪带着粗棉线神经下方穿,扎紧(两次),后
2)到肌,用眼科剪轻轻深入其下方将腓肠肌与其它肌肉分离,然后用眼科剪带着线穿过腓肠肌靠跟腱的一端,紧(两次),然后用手术剪剪断肠
3)粗提起游离出的坐骨神经,再用骨剪从股骨靠上的地方剪断,然后用手术剪尽量除股骨上的肌肉,最后将制备的坐骨神经-腓肠肌标本放在盛任
5.棉起坐骨神经,用任氏液蘸了的湿锌铜弓轻轻触碰坐骨神经,观察腓肠肌是否发生收缩,若生收缩,即说明所制备的坐骨神-腓肠肌标本有兴奋性,若不能发
五. 实验结果与
结:最终得到了坐骨神经-腓肠肌标本,且经锌铜弓检验,腓肌能发生收缩。
腓肠肌
坐骨神
经 股骨
生科学学院生理学实验 六.
1.毁时找准枕骨大孔,若不能一下子看出其位置,可将蟾蜍的头向后扳,背部出现的凹陷即为枕骨大孔,将毁针插入枕骨大孔时,若有阻塞感表明插的位置不,本次实验在毁髓后有自
有问题;
2.在离坐骨神经的过程中,神经分针、粗棉线等接触神经的器物用前均需用任氏液湿润,并且尽量要让金属手接触到神经,
温度对蟾蜍坐骨神经腓肠肌收缩的影响
温度对蟾蜍坐骨神经腓肠肌收缩的
甄涛、思敏、梅、周佳萍、刘洁、王婵媛、陈显官、任钧 (05级生物技术.生命科学学院.陕西师范大学.陕.西安.710062) 摘要:本文研究不同的温度下青蛙的肌收缩情和不同刺激下的肌肉收缩情况。结果表明,青蛙腓肠肌肌肉缩的最适温度是20?,温少于20?时,肌肉收缩能力温度升高而,温度大20?时,肌肉收缩能力随温度升
关词:温度,坐骨神经腓肠肌,阈强度,最适强度,收缩,强收缩频率,
温度对肉收缩都定响。肌肉变暖使它对刺激的反应更快和强。收缩期和舒张期都缩短,潜伏期变短。降低肌肉温度产生相反的效果,缩减弱以及所有的时相都延长。ATP合成过程是一系列的酶促反应,温度的变化主是通影各种酶的,而影响肌肉收缩时的能量供应,导致肌肉收缩能力的改变。同时由ATP的缺乏,影响了钙离子泵的能,导致钙离子代谢常,也会影响肉的舒张速度。度也可过响肌肉的粘滞性和弹性等因素影响肌肉的收缩
1、材料和方法
1.1.1解剖器具:常用解剖器具、大剪刀、玻璃解剖针、
1.1.2 控温器具:250ml烧杯一只、500ml烧杯一只、冰块、恒温浴锅、纸(或吸水
1.1.3据处理:RM6240B生理信号采集系统、刺激电极、张力换能器、屏蔽盒 1.1.4试剂:任氏液(500ml预冷于5?冰箱中,500ml预热于40?
1.1.5实验动物:蟾蜍,只
1.2实验方案
1、制作蛙腓肠肌标本
2、直接测量其单收缩的阈强度、最适强度、收缩力、强直缩频率、
3、将标本浸入特定温度任氏夜中,2min后取出,用吸纸吸水后,再测
4、重复步骤1,3,但温度根据下面的数据采集表
5、分用温为5?、10?、15?、20?、25?、30?、35?的任氏液不断滴在肌肉,使肌肉温度有所改变,保持湿润,测量其单收缩时各据 6、数据处:以温度的改变量为衡量指标,比较在不同温对蟾蜍的坐骨神经腓肠收缩的百分改变量。改变量=(相度数值—室温数值)/常温数值 2、
2.1测量温和相应温度下蟾蜍坐骨神经腓肠肌收缩单收缩的阈强度、最适强度、收缩力、强直收缩频率、强直收缩力(图一为5度测各数的图像输出,其余不再重复)所得数如表一所示,通过算得不同温度对蟾蜍的坐骨神腓肠肌
图一:在5?时测量各参数的图
表:不同温度单收缩的阈强度、最适强度、收缩力、强直收缩频率、强直缩力 号 温
阈强度 最适强收缩力 强直收
度 缩频率 力 1 室温 0.04 0.07 3.59 11 24.47 2 5 0.08 0.13 2.49 11 24.47 3 室温 0.04 0.07 3.59 9 66.02 4 10 0.05 0.09 16.98 7 26.91 5 室 0.04 0.08 21.82 9 26.05 6 15 0.06 0.1 13.45 11 28.78 7 室温 0.08 0.1 19.68 9 26.78 8 20 0.06 0.08 21.89 11 27.02 9 室温 0.07 0.12 25.08 7 25.08 10 25 0.04 0.07 21.6 9 22.86 11 室温 0.04 0.09 21.53 13 28.6 12 30 0.04 0.09 15.59 13 26.44 13 室
表二:同温度单收缩的阈强度、最适强度、收缩力、强直收缩频率、强直收缩力改变量 温阈强度 最适度 收力 强直收缩频
5 1 0.857143 -0.306406685 0 0
10 0.25 0.285714 3.729805014 -0.222222222 -0.592396244
15 0.5 0.25 -0.383593034 0.222222222 0.104798464
20 -0.25 -0.2 0.112296748 0.222222222 0.008961912
25 -0.42857 -0.41667 -0.138755981 0.285714286 -0.088516746
30 0 0 -0.275894101 0 -0.075524476
35 0.5 0.388889 -0.900217865 0.222222222 -0.875508544
2.2数据处理:在不同温度下各参数的百分改变
4阈强度
3最适强度
收缩力 2强直收缩
强直收缩力 1
0
5101520253035-1
3、讨论
由上图可知,在低于20度时温度的改变对肌肉收缩影响较大,尤是在10度收缩力的改。当温高于20度以,
3.1:阈强度
在5度时,阈强度最大,原因是由于温度过低,能量会供应不足,肌肉不易收,20时阈强度最
3.2最适强度
5度时最适强度最大,原因是由于温度过低,能量会供应不足,肉很难达到最适强度,20度时适强度最小,
3.3收缩力
在10度时收缩力最大,在20 度时收缩力出现一个峰值,20度以收缩能力就开始慢慢下,以后随度的持续升高,收
3.4强直收缩频
图中,15、20、25度时强直收缩频率最大,可认为肉温处于最理想
3.5强直收缩力
在10度直收缩力最小,原因还是因为温度过低,能量供应不足。在15度时强直收力最大,15度以后收缩力开减小,30随温度的持续升高,强
综上所,温度从10?开始,随温度的升高,肌肉的收缩能力增加。至20度时达最高峰,收缩幅度达到峰值,温度达到室温25度的时候,收缩能力就开始慢慢下降,以后随温度的持续升高,收缩能力速下降。由此看来,若肌肉的收缩能力处于最佳水平,应使肌肉温度处于最理想温度范围,温度过低,能量会应不足,肌肉的收能力自然不强;而温度过然能使量
参考文献
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学与理杂
musclecontraction.Science,1993,261:58-65 〔7〕Vale R.Getting a grip on myosin. Cell,1994,78:733-37
11-1蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备
实一 蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的
【实验目的】
蟾蜍骨腓肠肌标本常用于观察兴奋性、兴奋过程、刺激与反应的一些规律及骨骼肌收缩特点基本生理现象。学习蟾蜍坐骨神腓肠肌标本的备,在生理学实验中一
【实验对象】蟾
【实验器材】手术器械、磁砖、任氏液、锌铜弓、探针、玻璃针、滴管、
【实验过程】
1(坏经统 以左手握住蟾蜍,食指压住其头部并略下弯,将探针自枕骨大孔插入,左右横断脊髓,再向搅毁,然后将探针撤回伸人脊椎管中毁脊髓。如果蟾中枢神经破坏完全,其肌
图1(用探针损毁蟾蜍脑和脊髓
2(断柱并去除前肢及内脏 用骨剪自胸段剪断脊柱。沿脊柱的断口至耻骨处,将两腹壁的皮肤及肌肉剪开,再将直肠剪断,剔除前肢及内脏。注意伤两侧行坐骨神经丛。剪去肛门周围的皮肤和尾骨,剥去两后肢的皮肤(图2)。将去皮的两后肢标放在任氏湿的白
3(分离左右后肢 用粗剪沿标本的脊柱中线将标本为左两半。注意
4(离经 用玻璃分针将坐骨神经丛分离清楚,再从大腿背面股二头肌和半膜肌的缝中分离出坐骨神经。用粗剪刀将和坐骨神经连接的下脊柱余部分去。以镊子夹着与神经相连的脊柱骨、提起神经,并用跟科剪将坐骨神向大腿及其它部位发出的神经分支,一直坐骨神经分离至膝关节为止(
5(离腓肠肌 先分离腓肠肌的跟腱,用线结紧,自跟腱的附着点剪断。此时,提起结扎线便可将腓肠肌剥出来。将小其余部分剪去,保留约重1(5cm股骨。剔除附着骨上的其它肌肉后即完成坐骨
图2 蟾蜍坐骨神经标本制作过
(1) 剪断脊柱 (2)剪除前肢和内脏 (3)
图3蟾蜍坐骨神经腓肠肌标
6(标本的验查:用锌铜弓轻轻地与坐骨神经接触,如果标本制作完好,肌立即收缩,表明标本的兴奋良好。将标放在盛有任氏液的璃
【注意事项】
1(制备标本过程中,注意用任氏液浸湿标,以免标
2(尽量避免用手或金属器件直接接触所需要的神经和肌肉,特别要心不使蟾蜍皮肤毒腺分泌蟾蜍素粘神经肌肉标本上,
【实验要求】
每小组做出一个机能良好的神经肌